[发明专利]一种金柑蔗糖生物合成关键酶基因FcSPP克隆和异源表达方法在审
| 申请号： | 202310220286.3 | 申请日： | 2023-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN116355926A | 公开（公告）日： | 2023-06-30 |
| 发明（设计）人： | 龙凌云;黄秋岚;毛立彦;黄秋伟;李慧敏;檀小辉;刘功德;吴伦忠;苏艳兰;王丽萍;艾静汶;田程飘;黄惠芳 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区亚热带作物研究所（广西亚热带农产品加工研究所） |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N15/11;C12N9/16;C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 戴嵩玮 |
| 地址： | 530000 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蔗糖 生物 合成 关键 基因 fcspp 克隆 表达 方法 | ||
1.一种金柑FcSPP基因，其特征在于，所述金柑FcSPP基因的CDS序列如SEQ ID No.1所示。
2.一组扩增权利要求1所述金柑FcSPP基因的CDS序列的引物对，其特征在于，所述引物对包括序列如SEQ ID No.4所示的上游引物FcSPP-5CDS和序列如SEQ ID No.5所示的下游引物FcSPP-3CDS。
3.权利要求1所述金柑FcSPP基因的CDS序列的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：以金柑总RNA反转录的cDNA为模板，利用权利要求2所述引物对进行PCR扩增，扩增产物为所述CDS序列；
所述PCR扩增的程序包括：95℃5min；95℃30s，54℃30s，72℃2min，30个循环；72℃10min，4℃保温。
4.一种金柑FcSPP基因，其特征在于，所述金柑FcSPP基因的cDNA全长序列如SEQ IDNo.2所示。
5.一组扩增权利要求4所述金柑FcSPP基因的cDNA序列的引物对，其特征在于，所述引物对包括序列如SEQ ID No.10所示的上游引物FcSPP-5UTR和序列如SEQ ID No.11所示的下游引物FcSPP-3UTR。
6.权利要求4所述金柑FcSPP基因的cDNA序列的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：以金柑总RNA反转录的cDNA为模板，利用权利要求5所述引物对进行PCR扩增；
所述PCR扩增的程序包括：95℃5min；95℃30s，54℃30s，72℃1min，30个循环；72℃10min，4℃保温。
7.基于权利要求2所述金柑FcSPP基因的cDNA的UTR区域设计的RACE引物组，其特征在于，包括序列如SEQ ID No.6所示的第一轮5’UTR区RACE扩增特异引物FcSPP-5GSP1和SEQID No.7所示的第一轮3’UTR区RACE扩增特异引物FcSPP-3GSP1，以及SEQ ID No.8所示的第二轮5’UTR区RACE扩增特异引物FcSPP-5GSP2和SEQ ID No.9所示的第二轮3’UTR区RACE扩增特异引物FcSPP-3GSP2。
8.一组测定权利要求1或权利要求4所述金柑FcSPP基因表达量的特异性引物对，其特征在于，包括序列如SEQ ID No.14所示的上游引物FcSPP-F2和序列如SEQ ID No.15所示的下游引物FcSPP-R2。
9.权利要求1所述金柑FcSPP基因的CDS序列或权利要求2所述引物对在金柑FcSPP基因异源表达中的应用。
10.权利要求1所述金柑FcSPP基因或权利要求8所述特异性引物对在金柑蔗糖生物合成机理研究中的应用。
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