[发明专利]一种放射性原位疫苗的制备方法

说明书

一种放射性原位疫苗的制备的方法，包括以下步骤：首先用氯化钙和碳酸钠溶液制备碳酸钙微球粉末，然后用磷酸盐溶液与碳酸钙微球粉末制备介孔羟基磷灰石，再加入锰盐制得锰掺杂羟基磷灰石微球；然后用放射性核素进行标记，制得放射性核素标记的锰掺杂羟基磷灰石微球。本发明采用的放射性核素治疗可以很好地将射线局限于肿瘤部位，在持续照射肿瘤的同时可以避免全身反应；选用的锰佐剂作为人体必须微量元素，更加安全且廉价易获得。另一方面，微球自身掺杂的锰在释放后可以激活免疫，另外微球所具有的特殊介孔结构可以实现对肿瘤抗原的高效捕获，维持肿瘤部位高浓度的抗原浓度，持续激活免疫，产生抗肿瘤效果，实现普适的肿瘤治疗。

技术领域

本发明涉及疫苗的制备，具体为一种放射性原位疫苗及其制备方法。

背景技术

近年来肿瘤免疫治疗正在如火如荼地开展中，治疗性肿瘤疫苗因其卓越的疗效获得了人们的广泛关注。传统肿瘤疫苗通常是外源性给予肿瘤抗原，并结合佐剂，激活免疫，但其仅能对给定的抗原产生作用，且新抗原难以获得，使其具有相应的局限性。原位疫苗作为一种仅注射佐剂，使肿瘤本身成为抗原工厂的策略，可以在高度特异性杀伤肿瘤的同时保持对人群及不同瘤种的普适性，提供了建立通用原位免疫治疗策略的机会。

利用放疗联合免疫佐剂作为原位疫苗的策略已经在临床前及临床试验中广泛开展并取得优异的治疗效果，但仍存在一些可以改进的问题。例如体外放疗无法做到持续释放抗原，且副作用无法避免。同时现有策略需要反复注射佐剂，疗程长，小分子佐剂例如CpG，也易扩散和被代谢。此外现有原位疫苗对抗原捕获效率低，激活树突状细胞有限。因此迫切需要设计出可以持续引起抗原释放、负载免疫佐剂并高效捕获抗原的通用原位疫苗策略。

发明内容

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种放射性原位疫苗的制备的方法，包括以下步骤：

S1:向带有搅拌装置的反应器中加入等体积浓度为0.1-1mol/L的氯化钙和碳酸钠溶液，所述带有搅拌装置的反应器快速搅拌10-120S得到白色沉淀，将所述白色沉淀洗涤后进行干燥得到碳酸钙微球粉末。

S2：配制0.5-2mol/L的磷酸盐溶液，再向所述磷酸盐溶液中加入步骤S1所得碳酸钙微球粉末，然后均匀混合得到溶液A，再向溶液A中加入锰盐得到溶液B，将溶液B在100-200℃条件下反应12-48h得粉末C，将粉末C洗涤后进行干燥得到锰掺杂羟基磷灰石微球；制备介孔羟基磷灰石作为疫苗的载体，磷酸根有利于核素的标记，同时羟基磷灰石的晶型结构使得锰离子的掺杂更加简单，形成的介孔材料有着更大的比表面积，有着对抗原更强的吸附能力。选择锰为免疫佐剂，其可以激活cGAS-STING通路，以激活先天免疫和适应性免疫。

S3：取0.05-2mg步骤S2所得锰掺杂羟基磷灰石微球悬浮在4-160μL生理盐水中，然后向生理盐水中加入5-20μL浓度为0.1-0.5mol/L的碳酸氢钠溶液，得到溶液D，再向溶液D中加入0.1-1mCi放射性核素，得到混合液E，然后调节混合液E的pH值至5-10，在25-90°条件下进行标记1-120min得到混合物F，将F洗涤后得放射性核素标记的锰掺杂羟基磷灰石微球。选择放射性核素作为射线源，对肿瘤进行持续的照射，相较于外照射，放射性核素持续衰变发出的射线可以使肿瘤抗原的释放最大化。

优选的，步骤S2中所述磷酸盐为磷酸氢二铵和磷酸二氢铵中的一种；所述锰盐为氯化锰、氧化锰、磷酸二氢锰中的一种。

优选的，步骤S2中碳酸钙微球粉末中的钙含量与磷酸盐中磷含量的摩尔比值为1-2。

优选的，步骤S2中碳酸钙微球粉末中的钙含量与锰盐中锰的含量的摩尔比值为9-99。

优选的，步骤S3中，所述放射性核素为镥177、钇90、镭223中的一种。