[发明专利]一株多重耐药大肠杆菌及其应用

说明书

一株多重耐药大肠杆菌及其应用，本发明涉及一株多重耐药大肠杆菌。本发明的目的是为了提供一株多重耐药大肠杆菌，本发明一株多重耐药大肠杆菌为大肠杆菌(Escherichia coli)WEC，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是中国武汉市武汉大学，保藏日期是2022年6月7日，保藏编号为CCTCCN0.M2022799。本发明多重耐药大肠杆菌对四环素类、喹诺酮类及大环内酯类抗生素具有较高的耐药性，同时基因组中携带着种类较多、数量较大的耐药基因。本发明为构建我国耐药微生物资源库提供数据和信息基础。本发明应用于微生物技术领域。

技术领域

本发明涉及一株多重耐药的大肠杆菌及其应用。

背景技术

抗生素因具备抑制或杀灭病原体的效能，被广泛用于人和动物的疾病治疗以及牲畜、水产等养殖业。随着使用需求增加，抗生素的种类日趋多样化，大量未被吸收利用的抗生素进入环境中，抗性菌(即耐药菌，antibiotic resistance bacteria，ARB)和抗生素抗性基因(即耐药基因，antibiotic resistance genes，ARGs)的类型和数量逐渐增多。环境是残留抗生素的主要归趋，在土壤、水、沉积物等多种环境中，甚至在人类活动不多的南极地区也检测出耐药菌和耐药基因。医院废水、居民生活污水经污水收集管网排放至污水处理厂，使污水厂成为耐药菌群和耐药基因的重要富集与转移场所。作为关键的点源污染源，污水处理厂在抗生素耐药性传播中发挥的作用不容忽视。我国污水厂中抗生素的检出浓度介于ng至μg单位之间。喹诺酮类、四环素类、大环内酯类及β-内酰胺类是我国北方冬季常用的四大类抗生素，其中部分在污水厂中的检出率可达μg级别。我国东北生活污水和工业废水两种污水处理厂出水中ARGs检出范围为10³～10⁵copies/mL。

耐药菌(ARB)是指能够抵制抗生素对其自身影响的微生物，对3类及以上抗生素产生耐药性的微生物称为多重耐药菌(Multi drug-resistant Organism，MDRO)。随着抗生素耐药性研究的深入，已在多个微生物种属中检测到耐药菌的存在。例如产超广谱β-内酰胺酶沙门氏菌主要存在于肉类食品中，临床常见耐药菌有鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌等。耐药菌是新兴污染物耐药基因的载体，耐药菌中的可移动遗传元件为耐药基因的转移提供了条件。通过耐药菌研究耐药基因的转移机制，为治理耐药菌和耐药基因转移导致的环境污染及安全问题奠定理论基础。研究耐药菌的耐药机制，则为抗生素的新药研发提供理论依据。

发明内容

本发明的目的是为了提供一株多重耐药的大肠杆菌。

本发明一株多重耐药大肠杆菌为大肠杆菌(Escherichia coli)WEC，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是中国武汉市武汉大学，保藏日期是2022年6月7日，保藏编号为CCTCC N0.M2022799。

本发明一株大肠杆菌(Escherichia coli)WEC用于对抗生素耐药性的研究。

本发明以哈尔滨污水处理厂为采样点，于2020年10月对污水厂的进水、曝气池及出水3个采样点进行采样。每个样点各采集2L，分装并贴标签，放入装有冰袋的运输箱中。待所有样点采集完毕，将样品置于冰上及时运回实验室，4℃保存。用于后续进行耐药菌的筛选鉴定、耐药特性研究以及全基因组测序的研究。

一、多重耐药大肠杆菌的筛选与鉴定

在实验室通过添加单一抗生素(四环素类、磺胺类、喹诺酮类及大环内酯类)筛选得到耐药菌，共得到29株菌。根据CLSI M100执行标准，采用K-B纸片法对筛选得到的耐药菌进行定性检验，共得到25株多重耐药菌，结合菌株的形态特征和生理生化实验结果，根据第三版《微生物学实验》的要求初步筛出多重耐药大肠杆菌，通过分子水平的鉴定进一步确认，并构建系统发育树。

二、多重耐药大肠杆菌的全基因组测序