[发明专利]一种红细胞冻干工艺、冻干红细胞和复水方法在审
申请号: | 202310223164.X | 申请日: | 2023-03-09 |
公开(公告)号: | CN116195578A | 公开(公告)日: | 2023-06-02 |
发明(设计)人: | 刘永兴 | 申请(专利权)人: | 北京朴汇细胞生物科技有限公司 |
主分类号: | A01N1/02 | 分类号: | A01N1/02;C12N5/078 |
代理公司: | 北京维正专利代理有限公司 11508 | 代理人: | 曹蓉 |
地址: | 101300 北京市顺义区金航西路4*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 红细胞 工艺 方法 | ||
1.一种红细胞冻干工艺,其特征在于,包括红细胞预处理、冷热循环处理;
其中,所述冷热循环处理为:将所述红细胞预处理获得的预处理红细胞在39±2℃下保存5-20min,然后在4±2℃下保存5-20min;重复上述操作2-8次,获得细胞悬液。
2.根据权利要求1所述的红细胞冻干工艺,其特征在于,所述红细胞预处理的具体步骤为:将红细胞与冻干保护剂A进行混合,获得预处理红细胞;
所述冻干保护剂A包括以下组分中的一种或几种:EGCG 35-38mg/100mL、羟基四氢嘧啶455-475mg/100mL、维生素C 460-500mg/100mL、依达拉奉0.15-0.23mg/100mL、槲皮苷0.20-0.27mg/100mL、乙酰半胱氨酸465-485mg/100mL、四氢嘧啶455-470mg/100mL、海藻糖55-60g/100mL,溶剂为磷酸盐缓冲液PBS。
3.根据权利要求1所述的红细胞冻干工艺,其特征在于,所述红细胞冻干工艺还包括再处理步骤,具体为:向所述细胞悬液中加入冻干保护剂B,获得红细胞样品;
所述冻干保护剂B包括以下组分中的一种或几种:EGCG 17-20mg/100mL、羟基四氢嘧啶450-480mg/100mL、右旋糖酐28-35g/100mL、麦芽糖28-35g/100mL,溶剂为磷酸盐缓冲液PBS。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的红细胞冻干工艺,其特征在于,所述红细胞冻干工艺还包括冷冻步骤和干燥步骤;所述冷冻步骤为:将所述红细胞样品在-80±2℃下保存,获得冷冻红细胞样品。
5.根据权利要求4所述的红细胞冻干工艺,其特征在于,所述干燥步骤为:将冷冻红细胞样品首先在真空度为1-3Pa、隔板温度为-(30-50)℃的条件下进行一次冻干,时间≥12h;然后升高隔板温度到10-20℃,升温速率为0.05-0.22℃/min,并在此温度下保温1h以上,从而获得冻干红细胞。
6.一种利用权利要求1-5中任一向所述的红细胞冻干工艺获得的冻干红细胞。
7.一种复水方法,其特征在于,采用复水液对权利要求6所述的冻干红细胞进行复水,获得复水后红细胞;所述复水液包括复水液R1;
复水液R1包括以下组分中的一种或几种:EGCG溶液、维生素C溶液、右旋糖酐水溶液、麦芽糖水溶液。
8.根据权利要求7所述的复水方法,其特征在于,所述复水方法具体包括以下步骤:将复水液R1加入至所述冻干红细胞中,直至所述冻干红细胞溶解,获得复水后红细胞。
9.根据权利要求8所述的复水方法,其特征在于,所述复水方法还包括以下步骤:向所述溶解后的冻干红细胞中再加入复水液R2;
所述复水液R2包括以下组分中的一种或几种:EGCG溶液、维生素C溶液、右旋糖酐磷酸盐缓冲液、麦芽糖磷酸盐缓冲液。
10.一种利用权利要求7-9中任一项所述的复水方法获得的复水后红细胞。
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