[发明专利]用于代谢相关脂肪性肝病诊断的生物标志物、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于吸烟者代谢相关脂肪性肝病诊断的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为受试者生物样本中的不少于两种神经酰胺类成分以及尼古丁类成分，所述生物样本为受试体的血清、血浆或粪便样本。

2.如权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述神经酰胺成分选自Cer16：0、Cer18：0、Cer2：0、Cer22：0、Cer24：0、Cer24：1，所述尼古丁衍生物类成分选自尼古丁、4-羟基-1-(3-吡啶)-1-丁酮、2，5-二羟基吡啶；其中，神经酰胺及尼古丁衍生物的组合物的预测能力显著强于单独每类成分作用。

3.一种用于代谢相关脂肪性肝病诊断的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有用于检测权利要求1或2所述的生物标志物的表达水平的试剂。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括所述生物标志物的标准溶液和内标标准溶液，所述内标标准溶液指用同位素标记的生物标志物的标准溶液。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述同位素标记的方式是²H或¹³C。

6.如权利要求3—5任一所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒还包含萃取液，萃取液由甲醇和氯仿组成，甲醇和氯仿的体积比为1∶1到5∶1，以及进一步可包含700μL的96孔板、350μL的V型96孔板、封板硅胶、96孔密封铝膜。

7.如权利要求3-5任一所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法为：测定受试体的粪便中生物标志物的表达水平，并将这些测定值输入随机森林模型得到截断值进行判定。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法包括下列步骤：

a)配制不同浓度的代谢产物标准品溶液；

b)配制内标标准品溶液配制；

c)制备受试体血清、血浆或粪便样本；

d)将c)中制得的样本以液相色谱和质谱进行测定，计算样本中代谢产物的浓度；

e)将d)中计算得到的生物标志物的浓度输入随机森林模型或梯度提升树模型进行计算，按照分值对受试体是否为代谢相关脂肪性肝病进行判定。