[发明专利]基于滤芯过滤和MALDI-TOF MS检测样品中关注化合物的方法

说明书

本申请公开了基于滤芯过滤和MALDI‑TOF MS检测样品中关注化合物的方法，包括如下步骤：S1、选取具有过滤功能的靶板；S2、将样本与具有吸附基团的介质颗粒混合均匀，形成悬浊液，混合过程中介质颗粒上的吸附基团与样本中关注的化合物结合；S3、将悬浊液转至具有过滤功能的靶板上进行过滤，使得介质颗粒以及与介质颗粒结合的关注化合物被截留在具有过滤功能的靶板上；S4、将基质覆盖在介质颗粒以及与介质颗粒结合的关注化合物上；S5、将覆盖有基质的具有过滤功能的靶板放至MALDI‑TOF MS系统中进行检测。本申请采用介质颗粒吸附样本中的关注化合物，并结合具有过滤功能的靶板截留介质颗粒和关注化合物，从而可实现对关注化合物进行高灵敏度的检测。

技术领域

本申请涉及MALDI-TOF检测样品技术领域，尤其是涉及基于滤芯过滤和MALDI-TOFMS检测样品中关注化合物的方法。

背景技术

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）具有高灵敏度和高质量检测范围，可检测的相对分子质量高达几十万，其作为一种“软电离”质谱，具有样本不易碎裂、分子离子峰强的优点，解决了非挥发性和热不稳定性生物大分子解吸离子化的问题，具有强大的分析功能，已在医学诊断领域中有着广泛的应用。

每种疾病发生、发展过程中都会产生一系列特异的蛋白等化合物， MALDI结合靶板是目前检测蛋白等化合物常用的技术手段，检测方法为：首先，通过化学修饰使得靶板的靶点上附着有吸附基团，然后，将待检测的样本溶液点至具有吸附基团的靶点上，待检测的样本溶液中的蛋白等化合物与吸附基团结合，由于靶点直径为1～2mm，靶点直径较小，且只聚集在靶点表面，导致吸附基团不能与蛋白等化合物充分接触，因此，需要将靶板放至摇床上长时间摇动，以新冠感染者血清样本为例，需要经6小时摇动，才能使关注的蛋白等化合物与吸附基团充分接触，进而较好地结合，再经过几十分钟摇床淋洗，去除干扰物之后，取出靶板，将基质覆盖在靶点上，待干燥后，采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术进行谱图的采集和处理，以对待检测样本进行分析。然而，采用上述检测方法需要对靶板进行化学修饰，制造工艺较为复杂，成本也较高，而且，为了使蛋白等化合物与吸附基团较好地结合，需要将靶板在摇床上摇动数小时，再将靶板淋洗十几分钟，导致检测时间较长。

目前，也有采用固相萃取柱的方法以避免对靶板进行化学修饰和摇床摇动的步骤，采用固相萃取柱的方法吸附蛋白等化合物后，需要进行洗脱，再将洗脱下来的蛋白等化合物点至靶板的靶点上，此方法首先是需要的样品量很大，必需的洗脱步骤使液体量很大，所以必须采取浓缩的步骤，存在操作繁琐的问题。在洗脱过程中，由于存在强吸附化合物等原因，部分关注的化合物并没有被洗脱下来，从而导致重要信息丢失，进而影响了检测结果的准确性。

发明内容

为了解决上述至少一种技术问题，开发一种检测时间短、成本低并且较为简单的检测方法，本申请提供了基于滤芯过滤和MALDI-TOF MS检测样品中关注化合物的方法。

本申请提供的基于滤芯过滤和MALDI-TOF MS检测样品中关注化合物的方法，包括如下步骤：

S1、选取具有过滤功能的靶板，待用；

S2、将样本与具有吸附基团的介质颗粒混合均匀，制得悬浊液，在混合过程中所述介质颗粒上的吸附基团与样本中的关注化合物相结合；

S3、将所述悬浊液转至所述具有过滤功能的靶板上进行过滤，使得所述介质颗粒以及与所述介质颗粒相结合的关注化合物被截留在所述具有过滤功能的靶板上；

S4、将基质覆盖在所述介质颗粒以及与所述介质颗粒相结合的关注化合物上，制得载样靶板；

S5、将所述载样靶板放至MALDI-TOF MS系统中进行检测。