[发明专利]重组人三型胶原蛋白、注射剂及医学美容产品中的应用

权利要求书

1.一种重组人三型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括：

构建重组人三型胶原蛋白的重组表达质粒；

将所述重组质粒转入毕赤酵母，得到重组菌株；以及

对所述重组菌株进行诱导表达，收集发酵液，纯化即可得到所述重组人三型胶原蛋白；

其中，所述重组表达质粒的构建包括：

构建质粒pUC57-M3；

依据所述质粒pUC57-M3构建质粒pUC57-M3-M1；

依据质粒pUC57-M3-M1构建质粒pUC57-M3-M1-M2；

依据质粒pUC57-M3-M1-M2构建重组表达质粒pPICZαA-M3-M1-M2；

其中，M1、M2、M3的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～3所示。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，构建质粒pUC57-M3的步骤包括：

对M3序列进行PCR扩增，得到携带pUC57同源臂的M3序列；

对pUC57采用SacI和BSP681进行使用的双酶切反应，得到pUC57的线性化序列；

将携带pUC57同源臂的M3序列与pUC57的线性化序列进行同源重组反应，得到质粒pUC57-M3。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，M3序列进行PCR扩增过程中，采用M3-F和M3-R为引物对，M3-F和M3-R的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～5所示。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，“依据所述质粒pUC57-M3构建质粒pUC57-M3-M1”的步骤包括：

对M1序列进行PCR扩增，得到携带pUC57-M3同源臂的M1序列；

采用Mpln103I和BamH1对pUC57-M3进行双酶切，得到pUC57-M3的线性化序列；

将携带pUC57-M3同源臂的M1序列与pUC57-M3的线性化序列进行同源重组反应，得到质粒pUC57-M3-M1。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，M1序列进行PCR扩增过程中，采用M1-F和M1-R为引物对，M1-F和M1-R的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.6～7所示。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，“依据质粒pUC57-M3-M1构建质粒pUC57-M3-M1-M2”的步骤包括：

对M2序列进行PCR扩增，得到携带pUC57-M3-M1同源臂的M2序列；

采用ApaI和PstI对pUC57-M3-M1进行双酶切，得到pUC57-M3-M1的线性化序列；

将携带pUC57-M3-M1同源臂的M2序列与pUC57-M3-M1的线性化序列进行同源重组反应，得到质粒pUC57-M3-M1-M2。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，M2序列进行PCR扩增过程中，采用M2-F和M2-R为引物对，M1-F和M1-R的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.8～9所示。

8.一种注射剂，包含权利要求1～7任一所述的制备方法制得的重组人三型胶原蛋白和不完全弗氏佐剂。

9.根据权利要求8所述的注射剂，其特征在于，还包含人重组音猬因子蛋白和透明质酸钠。

10.权利要求1～7任一所述的制备方法制得的重组人三型胶原蛋白在制备医学美容产品中的应用。