[发明专利]一种荧光化合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种荧光化合物，其特征在于：为ER-Green，其结构式为

2.权利要求1所述的荧光化合物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将4-溴-1,8-萘二甲酸酐和3,5-双(三氟甲基)苯甲胺加入到N,N-二甲基甲酰胺中，于50℃下搅拌4-8h，TLC板监测4-溴-1,8-萘二甲酸酐转化完全，加入N,N-二甲基乙二胺，于70℃下搅拌2-4h，然后依次经油泵抽干和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S1；

(2)将上述化合物S1、Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶解于吡啶中，室温下反应8-12h，然后依次经油泵抽干、复溶于二氯甲烷、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、1M盐酸水溶液洗涤有机相、有机相脱水并减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S2；

(3)将上述化合物S2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，室温下反应1-2h，然后经减压浓缩得到粗产物；将该粗产物、3,5-双(三氟甲基)苯基异氰酸酯和三乙胺溶解于二氯甲烷中，室温下反应30min，依次经饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、有机相脱水、减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S3；

(4)将上述化合物S3、N-甲基炔丙基胺和4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐加入N,N-二甲基甲酰胺中，室温下搅拌过夜，然后依次经油泵抽干、复溶于二氯甲烷、1M盐酸水溶液洗涤有机相、有机相脱水并减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得所述ER-Green。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述4-溴-1,8-萘二甲酸酐、3,5-双(三氟甲基)苯甲胺和N,N-二甲基乙二胺和N,N-二甲基甲酰胺的比例为40.00mmol:40.00mmol:200.00mmol:200.00mL；所述步骤(2)中，所述化合物S1、Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和吡啶的比例为3.93mmol:5.12mmol:19.64mmol:40.00mL；所述步骤(3)中，所述化合物S2、二氯甲烷、三氟乙酸、3,5-双(三氟甲基)苯基异氰酸酯和三乙胺的比例为3.10mmol:15mL:15mL:9.29mmol:9.30mmol；所述步骤(4)中，所述化合物S3、N-甲基炔丙基胺、4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐和N,N-二甲基甲酰胺的比例为0.20mmol:0.26mmol:0.60mmol:2.00mL。

4.权利要求1所述的荧光化合物作为活细胞内质网成像分析探针的应用。

5.一种荧光化合物，其特征在于：为ER-Green-proRed，其结构式为

6.权利要求5所述的荧光化合物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将4-溴-1,8-萘二甲酸酐和3,5-双(三氟甲基)苯甲胺加入到N,N-二甲基甲酰胺中，于50℃下搅拌4-8h，TLC板监测4-溴-1,8-萘二甲酸酐转化完全，加入N,N-二甲基乙二胺，于70℃下搅拌2-4h，然后依次经油泵抽干和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S1；

(2)将上述化合物S1、Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶解于吡啶中，室温下反应8-12h，然后依次经油泵抽干、复溶于二氯甲烷、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、1M盐酸水溶液洗涤有机相、有机相脱水并减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S2；

(3)将上述化合物S2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，室温下反应1-2h，然后经减压浓缩得到粗产物；将该粗产物、3,5-双(三氟甲基)苯基异氰酸酯和三乙胺溶解于二氯甲烷中，室温下反应30min，依次经饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、有机相脱水、减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S3；

(4)将上述化合物S3、ROX-EDA、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和三乙胺加入二氯甲烷中，室温下搅拌8-12h，然后依次经饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、有机相脱水并减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得所述ER-Green-proRed。