[发明专利]一种基于Ce26基因鉴定油莎豆成分的SYBR Green荧光定量PCR方法及其应用

权利要求书

1.一种鉴定油莎豆成分的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括上游引物Ce26-F101、下游引物Ce26-R276，所述上游引物Ce26-F101的序列如SEQ ID NO.1，所述下游引物Ce26-R276的序列如SEQ ID NO.2。

2.一种鉴定油莎豆成分的SYBR Green荧光PCR方法，其特征在于，所述SYBR Green荧光定量PCR方法采用权利要求1所述的引物组合物和SYBR Green的扩增体系中进行扩增。

3.根据权利要求2所述的SYBR Green荧光PCR方法，其特征在于，所述SYBR Green荧光PCR方法具体包含以下步骤：

S1)获得待鉴定样本的基因组DNA；

S2)采用包含的权利要求1所述的引物组合物实时荧光PCR反应体系对步骤1)中提取的基因组DNA进行扩增；

S3)出现特异性扩增的样本，则确认待鉴定样本中含有油莎豆成分；

优选地，S2)中实时荧光定量PCR反应体系中还包含SYBR Green；

优选地，所述步骤S2)中的反应体系为：DNA模板1μL，qPCR SYBR Green Master Mix 10μL，10μM正、反向引物各0.4μL，加ddH₂O补足至20μL；

优选地，S2)中扩增的Ct值小于40；

优选地，S1)中基因组DNA的浓度调整至0.032ng/μL-20ng/μL范围内；

优选地，所述步骤S2)采用荧光定量PCR进行扩增，所述荧光PCR的反应条件为：95℃预变性2min；95℃变性10s，60℃退火和延伸30s，40个循环。

4.一种鉴定油莎豆成分的SYBR Green荧光定量PCR方法，其特征在于，所述SYBR Green荧光PCR方法具体包含以下步骤：

S1)获得待鉴定样本的基因组DNA；并进行定量梯度稀释；

S2)采用包含上述引物组合物实时荧光定量PCR反应体系对步骤1)中提取并稀释的不同浓度基因组DNA进行扩增；

S3)采用S2)的反应体系扩增已知浓度DNA样品，并根据荧光强度绘制标准曲线；

S4)将S2)步骤中获得的基因组DNA的荧光强度值在步骤S3)获得的标准曲线进行回归计算样品中基因组DNA含量；

优选地，所述步骤S2)中的反应体系为：DNA模板1μL，qPCR SYBR Green Master Mix 10μL，10μM正、反向引物各0.4μL，加ddH₂O补足至20μL；

优选地，S2)中扩增的Ct值小于40；

优选地，S1)中基因组DNA的浓度调整至0.032ng/μL-20ng/μL范围内；

优选地，所述步骤S2)采用荧光定量PCR进行扩增，所述荧光定量PCR的反应条件为：95℃预变性2min；95℃变性10s，60℃退火和延伸30s，40个循环。

5.一种鉴定油莎豆成分的分子标记，其特征在于，所述的分子标记能够通过权利要求1的引物组合物扩增油莎豆DNA获得。

6.权利要求5所述的分子标记在鉴定样品中油莎豆成分中的用途；

优选地，所述样品为植物原株、植物种子、动植物样品颗粒或粉末、包含动植物样品的液体。

7.一种鉴定油莎豆成分的引物组合物在鉴定样品中油莎豆成分中的用途；

优选地，所述样品为植物原株、植物种子、动植物样品颗粒或粉末、包含动植物样品的液体。

8.一种试剂盒，其特征在于所述试剂盒包含权利要求1所述的鉴定油莎豆成分的引物组合物，所述上游引物Ce26-F101的序列如SEQ ID NO.1，所述下游引物Ce26-R276的序列如SEQ ID NO.2；

优选地，所述试剂盒中还包含SYBR Green。