[发明专利]EGFR基因突变体的检测方法及应用在审
| 申请号： | 202310258429.X | 申请日： | 2023-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN116284335A | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 张洪磊;刘超;李高峰;王书廷 | 申请（专利权）人： | 云南中医药大学 |
| 主分类号： | C07K14/71 | 分类号： | C07K14/71;C12Q1/6886;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 成都九鼎天元知识产权代理有限公司 51214 | 代理人： | 和占宏 |
| 地址： | 650000 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | egfr 基因 突变体 检测 方法 应用 | ||
1.一种EGFR基因突变体，其特征在于：所述EGFR基因突变体包括G719C突变体、G719A突变体、G719D突变体和G719S突变体，所述G719C突变体为c.G2155T突变，G719A突变体为c.G2156C突变，G719D突变体为c.G2156A突变，G719S突变体为c.G2155A突变。
2.根据权利要求1所述的EGFR基因突变体，其特征在于：所述EGFR基因突变体中EGFR基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.6，G719C突变体的核苷酸序列为SEQ ID NO.7，G719A突变体的核苷酸序列为SEQ ID NO.8，G719D突变体的核苷酸序列为SEQ ID NO.9，G719S突变体的核苷酸序列为SEQ ID NO.10。
3.根据权利要求1所述的EGFR基因突变体，其特征在于：所述EGFR基因突变体中EGFR基因的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，G719C突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.2，G719A突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.3，G719D突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.4，G719S突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.5。
4.一种检测权利要求1所述的EGFR基因突变体的方法，其特征在于：其包括如下步骤：
从生物样品中提取核苷酸样本，序列扩增和DNA回收，一代测序法确定核苷酸序列，通过比较确定EGFR的突变形式。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述生物样品选自肿瘤样本。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述核苷酸样本为全基因组DNA和引物序列扩增的DNA样本。
7.一种检测权利要求1所述的EGFR基因突变体的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测EGFR基因突变体的试剂、DNA扩增的反应体系和反应条件。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂选自核酸探针或引物；和/或，
所述引物包括正向引物A和反向引物B，所述正向引物A的核苷酸序列为SEQ ID NO.11，所述反向引物B的核苷酸序列为SEQ ID NO.12；和/或，
所述DNA扩增的反应体系由DNA模板、10μM的正向引物SEQ ID NO.11、10μM的反向引物SEQ ID NO.12、2×HiFiTaq PCR StarMix（Dye+）和无菌双蒸水组成；和/或，
所述反应条件为94℃预变性2min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，32个循环，72℃终延伸5min。
9.一种如权利要求7所述的试剂盒在制备肺癌突变检测材料中的应用。
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