[发明专利]小麦抗白粉病基因PmYF267的KASP分子标记、检测方法及应用

权利要求书

1.小麦抗白粉病基因PmYF267在小麦抗白粉病育种中的应用，其特征在于，该基因来自抗白粉病普通小麦品系‘扬YF267’，定位于小麦7A染色体长臂上，在中国春参考基因组V2.0版本的物理位置为685–697Mb。

2.与小麦抗白粉病基因PmYF267紧密连锁的KASP分子标记，其特征在于，该KASP分子标记为7AK-685和7AK-697，所述的KASP分子标记7AK-685和7AK-697与基因PmYF267共定位于小麦7A染色体长臂上，并与PmYF267共分离。

3.根据权利要求2所述的KASP分子标记，其特征在于，所述KASP分子标记7AK-685的多态性为C/T；所述KASP分子标记7AK-697的多态性为G/A。

4.根据权利要求2所述的KASP分子标记，其特征在于，

所述的KASP分子标记7AK-685通过以下3条引物扩增得到，所述的3条引物包括2条上游引物和1条通用下游引物，所述2条上游引物5’端分别修饰不同的荧光基团；3条引物的核苷酸序列依次分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；

所述的KASP分子标记7AK-697通过以下3条引物扩增得到，所述的3条引物包括2条上游引物和1条通用下游引物，所述2条上游引物5’端分别修饰不同的荧光基团；3条引物的核苷酸序列依次分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

5.如权利要求2所述的KASP分子标记的特异性引物组合，其特征在于，7AK-685含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1～3所示的引物；7AK-697含有核苷酸序列如SEQ ID NO.4～6所示的引物。

6.权利要求2、3或4中所述的KASP分子标记，或权利要求5中所述的特异性引物组合在(1)～(3)中至少一种的应用：

(1)检测、定位和克隆小麦抗白粉病基因PmYF267；

(2)用于小麦抗白粉病基因PmYF267的分子标记辅助选择育种；

(3)鉴定或选育抗白粉病小麦品种。

7.一种检测小麦抗白粉病基因PmYF267的方法，其特征在于，采用权利要求2、3或4中所述的KASP分子标记，或权利要求5中所述的特异性引物组合对待测小麦样品进行基因型判定：

①KASP分子标记7AK-685等位型为CC则为携带纯合PmYF267的抗病基因型，若等位型为C/T则为携带杂合PmYF267的抗病基因型，若等位型为TT则为不携带PmYF267的感病基因型；

②KASP分子标记7AK-697等位型为AA则为携带纯合PmYF267的抗病基因型，若等位型为A/G则为携带杂合PmYF267的抗病基因型，若等位型为GG则为不携带PmYF267的感病基因型。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测小麦叶片的基因组DNA作为模板；

(2)利用所述KASP分子标记7AK-685和7AK-697的特异性引物组合分别对待测样品的基因组DNA进行PCR扩增，获得扩增产物；

(3)将扩增产物离心，观察PCR反应板底部，确保没有气泡；

(4)利用荧光定量PCR仪扫描PCR扩增产物基因型，35℃读取荧光信号；

(5)利用TaqManGenotyper v1.3.1对扫描结果进行数据基因型分析；

(6)按照多态性位点基因分型对待测小麦样品进行基因型判定。

9.一种鉴定或选育抗白粉病小麦品种的方法，其特征在于，采用权利要求2、3或4中所述的KASP分子标记，或权利要求5中所述的特异性引物组合对待测小麦样品进行基因型判定，选择携带PmYF267的抗病小麦样品：

①KASP分子标记7AK-685等位型为CC则为携带纯合PmYF267的抗病基因型，若等位型为C/T则为携带杂合PmYF267的抗病基因型，若等位型为TT则为不携带PmYF267的感病基因型；

②KASP分子标记7AK-697等位型为AA则为携带纯合PmYF267的抗病基因型，若等位型为A/G则为携带杂合PmYF267的抗病基因型，若等位型为GG则为不携带PmYF267的感病基因型。