[发明专利]一种猫CD62L多肽抗原及其多克隆抗体的制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种猫CD62L多肽抗原及其多克隆抗体的制备方法和应用，属于生物工程技术领域，猫CD62L多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。所述抗猫CD62L蛋白的多克隆抗体，以猫CD62L多肽与KLH蛋白偶联后得到的免疫原免疫动物获得。本发明所述抗猫CD62L多克隆抗体具有成本低、适用广、灵敏度高等特点，能够用于Western Blot等生物学免疫检测实验。利用本发明所述的多克隆抗体，可识别猫组织样本中的CD62L，可用于相关疾病的检测与诊断，为相关疾病的研究与治疗奠定重要的基础。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及一种猫CD62L多肽抗原及其多克隆抗体的制备方法和应用。

背景技术

CD62L，又称为L选择素，属于淋巴结归巢受体，表达于造血细胞某些分化阶段，包括大多数B细胞和未致敏T细胞（初始T细胞、T记忆干细胞和中央记忆T细胞）以及大多数单核细胞、中性粒细胞和嗜酸粒细胞。

CD62L介导白细胞与内皮细胞最初的滞留和滚动，对于未致敏淋巴细胞归巢到外周淋巴结和派氏集合淋巴结过程中起着重要作用。除此之外，CD62L介导白细胞迁移到炎症部位，对伤后或炎症后白细胞贴壁滚动、黏附、渗出及组织的病理变化有重要的作用。

因此，在炎症或创伤后CD62L表达量增高，而对CD62L的检测将能够反应组织的炎症情况。目前对宠物的疾病检测手段以及相关研究并未完善，因此，制备抗猫CD62L蛋白的多克隆抗体对于评价猫体内的炎症、创伤和健康状态以及了解其他疾病的进展具有重要意义。本发明填补了缺乏商品化抗猫CD62L多克隆抗体的空白，为CD62L在宠物方面的研究提供了基础资料。

发明内容

本发明的目的是提供一种猫CD62L多肽抗原及其多克隆抗体的制备方法；本发明的另一目的是提供上述抗猫CD62L多克隆抗体的应用。

本发明的目的是由以下技术方案实现的：

一种猫CD62L蛋白多肽，序列如SEQ ID No .1所示。

一种抗猫CD62L多克隆抗体制备方法，包括以下步骤：

猫CD62L多肽序列合成修饰多肽，将合成的修饰多肽与KLH载体蛋白交联形成复合蛋白，用复合蛋白免疫动物，共免疫4次，取免疫动物的血制备抗血清，protein G纯化柱法纯化抗血清中的抗猫CD62L多克隆抗体。

一种利用上述方法制备的抗猫CD62L多克隆抗体。

该抗体效价在1:128000以上。

所述抗体在Western Blot及其他生物学免疫检测中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1.本发明将与KLH载体蛋白交联后的CD62L多肽作为免疫原，对新西兰兔进行免疫和3次加强免疫，取免疫后兔子的血制备抗血清，之后通过protein G纯化柱法将抗血清纯化得到抗猫CD62L多克隆抗体，随后进行ELISA效价检测，Western Blot检测抗体的灵敏度和特异性，本方法简单，快速，成本低。

2.本方法制备的抗猫CD62L多克隆抗体效价高，灵敏度高，能特异识别出猫脾脏组织的CD62L，能够应用于猫CD62L的生物学免疫检测。

3.本发明填补了抗猫CD62L多克隆抗体的空白，为猫的一些基础研究奠定基础。

附图说明

图1为Western Blot图，图中免疫印迹的目的条带大小在35 kDa-48 kDa之间的条带，与猫CD62L蛋白的理论分子量（43 kDa）大小一致。

实施方式

实施例1：实验动物的免疫