[发明专利]基于二维在线磁珠吸附液相色谱质谱联用测定血浆中儿茶酚胺的检测仪器及其检测方法

说明书

本发明公开了一种二维在线磁珠吸附液相色谱质谱联用仪器测定血浆中儿茶酚胺的检测仪器及检测方法，包括采用前处理流路仪器与检测仪器一体化应用，检测仪器包括色谱柱和质谱仪，两者通过切换阀一相连通；前处理流路仪器用于运行水流动相，其包括依次相连的泵1、自动进样器、磁珠吸附柱，磁珠吸附柱通过切换阀二连入色谱柱，其中磁珠吸附柱外布设有环形磁场；还包括运行样本流动相的泵2，泵2通过切换阀二连入色谱柱。本方案应用磁珠前处理技术及二维液相色谱柱质谱联用检测技术，血浆样本仅需进行简单稀释即可直接进样，实现血浆中6种儿茶酚胺物质的快速在线检测，无需复杂的预处理，自动化程度高，检测结果准确可靠，适合临床样本分析检测。

技术领域

本发明涉及血浆中儿茶酚胺检测领域，具体是基于二维在线磁珠吸附液相色谱质谱联用测定血浆中儿茶酚胺的检测仪器及其检测方法。

背景技术

儿茶酚胺是一种含有儿茶酚(邻苯二酚)和胺基的神经类物质。包括去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)以及它们的衍生物。其主要生理作用是兴奋血管的α受体，使血管收缩，血压升高，与心血管疾病的发生和发展具有密切的关系。长期的高儿茶酚胺血症会引起一系列心脏并发症和血管并发症，例如心室肥厚、心肌梗死、心律失常以及血管内皮功能紊乱、颈动脉内膜中层厚度增厚等。因此，人体儿茶酚胺水平监测具有重要的临床意义。

目前，临床上开展的儿茶酚胺项目主要应用酶联免疫法(ELISA)或化学发光法对血液或尿液中多巴胺(DA)、肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)和香草扁桃酸(VMA)四项进行检测，由于肿瘤儿茶酚胺释放入血具有以下特点：(1)阵发性：肾上腺素(E)和去甲肾上腺素(NE)呈间歇性释放；(2)半衰期短：儿茶酚胺类物质释放后被多种酶代谢(1-2min)；(3)代谢物半衰期长：E和NE被代谢为3-甲氧基类物质(NMNs)物质，半衰期更长(1h以上)，在血液中停留时间更长等特点，直接检测儿茶酚胺易出现假阴性，而儿茶酚胺在细胞内的代谢呈持续性，其中间产物甲氧基肾上腺类物质(MNs)持续释放入血，检测MNs可以提高检测特异性及灵敏度。高效液相色谱柱串联质谱技术能够同时分离检测多种物质，灵敏度高，特异性强，解决了酶联免疫及化学发光法定量结果不准确问题，是临床儿茶酚胺物质检测的理想选择。

由于血液中儿茶酚胺物质含量极低，因此前处理过程需要通过固相萃取进行富集，固相萃取操作繁琐，耗时长，成本高。因此需要发展自动化程度高，操作简便，分析通量高的检测仪器，以适应临床大样本量检测。

为了解决上述问题，本案由此而生。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明发展了二维在线磁珠吸附液相色谱质谱联用测定儿茶酚胺物质的仪器及方法，解决了现有酶联免疫和化学发光定量结果不准确，假阴性的问题，以及质谱检测前处理固相萃取方法的操作繁琐，成本高问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：基于二维在线磁珠吸附液相色谱质谱联用测定血浆中儿茶酚胺的检测仪器，包括采用前处理流路仪器与检测仪器一体化应用，检测仪器包括色谱柱和质谱仪，色谱柱和质谱仪通过三通阀相连通；前处理流路仪器用于运行水流动相，其包括依次相连的泵1、自动进样器、磁珠吸附柱，磁珠吸附柱通过四通阀连入色谱柱，其中磁珠吸附柱外布设有环形磁场；还包括运行样本流动相的泵2，泵2通过四通阀连入色谱柱。

在四通阀不连至色谱柱或者三通阀不连接至质谱仪时，导入至三通阀或四通阀的液体分别排至外设的废液瓶2或废液瓶1中。

仪器分析流程：

S1：打开磁场，泵1运行水流动相，自动进样器依次进100μL含磁珠溶液，400μL活化液，600μL平衡液，800μL上样溶液，600μL淋洗液，流动相进入废液瓶1。泵2运行儿茶酚胺初始比例流动相，平衡色谱柱，流动相进入废液瓶2。(流路1图)