[发明专利]基于特异性抗原FHH的肝片吸虫胶体金检测方法

权利要求书

1.基于基于特异性抗原FHH的肝片吸虫胶体金检测方法，其特征在于：该检测方法通过肝片吸虫特异性抗原基因FHH、FHH蛋白、胶体金颗粒、金黄色葡萄球菌蛋白A标记的胶体金颗粒和检测试纸条进行检测，通过肝片吸虫cDNA表达文库筛选肝片吸虫特异性抗原基因FHH，建立了一种间接胶体金试纸条检测方法；检测过程中所述FHH蛋白与羊肝片吸虫感染阳性血清中的特异性抗体发生结合，使其胶体金免疫层析检测试纸条更具特异性；该试纸条可在常规环境中保存，无需仪器设备，且便于携带；该方法在15min左右即可肉眼观察结果，适合大范围临床样品检测。

2.根据权利要求1所述的基于基于特异性抗原FHH的肝片吸虫胶体金检测方法，其特征在于：所述肝片吸虫特异性抗原基因FHH，其基因序列如序列1所示；其抗原基因FHH的扩增引物，利用CEdesignV1软件设计，使用酶切位点BamHI、XhoI，其核苷酸序列如序列2所示。

3.根据权利要求1所述的基于特异性抗原FHH的肝片吸虫胶体金检测方法，其特征在于：所述FHH蛋白为纯化的pET-32a-FHH重组蛋白，使用生物信息学分析预测其可能具有较好的抗原性，并通过WesternBlotting验证该蛋白具有良好的反应原性。

4.根据权利要求1所述的基于特异性抗原FHH的肝片吸虫胶体金检测方法，其特征在于：所述胶体金颗粒的制备过程：利用柠檬酸三钠还原法烧制，制备40nm胶体金颗粒。

5.根据权利要求1所述的基于特异性抗原FHH的肝片吸虫胶体金检测方法，其特征在于：所述金黄色葡萄球菌蛋白A标记的胶体金颗粒，其制备方法如下：1mL胶体金溶液加2μL0.2mol/LK₂CO₃调节pH，加入5μgSPA蛋白进行标记，之后用10％BSA进行封闭，离心后弃上清，溶解于10％复溶液中并滴加在金标垫上。

6.根据权利要求1所述的基于特异性抗原FHH的肝片吸虫胶体金检测方法，其特征在于：所述检测试纸条通过PVC底板、样品垫、金标垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水板构成；其中金标垫上为金标抗体，NC膜检测线上为纯化的肝片吸虫特异性抗原FHH蛋白，NC膜质控线上为兔抗SPA二抗；最后将样品垫、金标垫、NC膜、吸水板相互重叠2mm组装成试纸条。