[发明专利]一种具有成骨活性的乌贼酶解产物的制备方法及应用

权利要求书

1.一种具有成骨活性的乌贼酶解产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：取乌贼全体清洗，取出海螵蛸，其余部分切段，匀浆1～2min，得乌贼浆；

S2：取步骤S1中乌贼浆，按料液重量比1:（5～50）加水复溶成溶液，向所述溶液中加入生物蛋白酶，搅拌酶解，每克乌贼浆加入生物蛋白酶40～8000U，酶解条件为温度30～70℃、搅拌速度50～300rpm、酶解时间2～5h；所述的生物蛋白酶为中性蛋白酶、碱性蛋白酶中的一种；

S3：将步骤S2中酶解产物升温至95℃灭酶10～20min，冷却至室温，离心处理10～20min，收集离心上清液；

S4：将步骤S3中上清液通过截留分子量为150～300Da的纳滤膜进行脱盐；

S5：将步骤S4脱盐后的溶液浓缩后再进行冷冻干燥，得到具有成骨活性的乌贼总酶解产物。

2.如权利要求1所述的乌贼酶解产物的制备方法，其特征在于，所述乌贼品种包括无针乌贼、金乌贼、针乌贼或虎斑乌贼。

3.如权利要求1所述的乌贼酶解产物的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述的生物蛋白酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰酶中的一种。

4.如权利要求1所述的乌贼酶解产物的制备方法，其特征在于，步骤S3中离心速度为3000～10000r/min。

5.如权利要求1所述的乌贼酶解产物的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述纳滤过程为：将溶液置于容器中，加入双蒸水，纳滤脱盐至一半体积后加水至原体积，直至流出液中电导率值与双蒸水接近为止。

6.如权利要求1所述的乌贼酶解产物的制备方法，其特征在于，步骤S5中所述浓缩为真空旋转蒸发，温度为30～60℃；所述冷冻干燥时间为3～5天，真空度在15～50Pa，真空泵启动温度为-60℃～-50℃。

7.如权利要求1所述的乌贼酶解产物的制备方法，其特征在于，步骤S3之后还包括超滤分离的步骤：采用截留分子量为3000Da的超滤膜对步骤S3上清液进行超滤分离，收集分子量3000Da的溶液，再经过步骤S4和S5后，得到分子量3000Da的具有成骨活性的乌贼酶解产物。

8. 如权利要求7所述的乌贼酶解产物的制备方法， 其特征在于，所述超滤分离过程为：将步骤S3上清液置于容器中，加入双蒸水后对其进行超滤分离，所述双蒸水的用量为上清液体积的5～20倍，超滤至一半体积后加水至原体积，重复两次。

9.权利要求1～8任一项制备方法制备得到的乌贼酶解产物在制备促进成骨细胞增殖的药品中的应用。