[发明专利]实时成像检测β-淀粉样蛋白的铂纳米酶及制备方法和应用

权利要求书

1.一种实时成像检测β-淀粉样蛋白的铂纳米酶的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将氯铂酸类化合物与阳离子配体的水溶液混合均匀，得到均相的阳离子包裹氯铂酸溶液；

(2)将还原剂加入到阳离子包裹氯铂酸溶液中并混合均匀；然后静置进行还原反应，直至溶液颜色趋于稳定，不再变化后反应结束，得到铂纳米酶溶液；

(3)将铂纳米酶溶液通过离心去除未反应物质，得到铂纳米酶储备液。

2.根据权利要求1所述的实时成像检测β-淀粉样蛋白的铂纳米酶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，氯铂酸类化合物为氯铂酸或氯铂酸盐，氯铂酸采用六水合氯铂酸，氯铂酸盐为氯铂酸钾或氯铂酸钠；阳离子配体为CTAB、CTAC或壳聚糖；

氯铂酸与阳离子配体的摩尔比为2～6:9；氯铂酸类化合物的浓度为1～10mM。

3.根据权利要求1所述的实时成像检测β-淀粉样蛋白的铂纳米酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，还原剂为硼氢化钠或抗坏血酸，浓度为5～50mM；还原剂逐滴加入阳离子包裹氯铂酸溶液中；还原反应温度为25～32℃，时间为20～60min。

4.根据权利要求1所述的实时成像检测β-淀粉样蛋白的铂纳米酶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，离心工艺在超滤离心管中进行，超滤离心管的规格为10kD，离心转速为10000～15000rpm，离心时间为8～15min。

5.一种权利要求1-4任一所述实时成像检测β-淀粉样蛋白的铂纳米酶的制备方法制备得到的铂纳米酶。

6.一种权利要求5所述铂纳米酶的应用，其特征在于，将铂纳米酶催化产生的荧光探针用于β-淀粉样蛋白的成像检测；成像检测包括体外成像检测和细胞内成像检测。

7.根据权利要求5所述的铂纳米酶的应用，其特征在于，体外成像检测的步骤如下：

A1、将铂纳米酶储备液进行稀释，得到铂纳米酶稀释液；

将Aβ粉末溶解在氨水中，得到Aβ单体溶液；然后将Aβ单体溶液用磷酸盐缓冲溶液稀释，得到Aβ生长液；将Aβ生长液进行孵育，得到Aβ纤维；

A2、将Aβ纤维吸附在流通池的底部，再将流通池置于荧光显微成像系统中；然后依次向流通池中通入铂纳米酶稀释液、树脂天青以及还原剂盐酸羟胺，再激发产物荧光，利用铂纳米酶催化无荧光的树脂天青还原生成高荧光试卤灵，最后采集催化产生的荧光信号，得到体外Aβ纤维的荧光成像图。

8.根据权利要求7所述的铂纳米酶的应用，其特征在于，步骤A1中，铂纳米酶储备液的稀释倍数为10～100倍；

步骤A1中，氨水的浓度为0.2％～2％，用冰水配置；

步骤A1中，Aβ粉末与氨水的质量体积比为1mg:50～400μL；

步骤A1中，磷酸盐缓冲溶液的浓度为20～50mM，pH为7.0～7.8；磷酸盐缓冲溶液选用PB或PBS；

步骤A1中，Aβ单体的稀释倍数为5～50倍；

步骤A1中，Aβ生长液的孵育温度为37～42℃，时间为12～24h；

步骤A2中，通入的Aβ纤维的浓度为1～10μM；

步骤A2中，流通池的底部带有石英玻片；

步骤A2中，荧光显微成像系统选用倒置荧光显微镜；

步骤A2中，树脂天青的浓度为0.1～1μM，盐酸羟胺的浓度为0.1～5mM；

步骤A2中，激发产物荧光选用可见激光，波长为530～570nm；

步骤A2中，采集荧光信号选用电荷耦合器件。