[发明专利]一株尼可霉素高产菌株、及其应用和筛选方法

权利要求书

1.一株尼可霉素高产菌株，所述菌株为刺孢吸水链霉菌MKL-8(Streptomyceshygrospinosus MKL-8)，所述菌株已由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCCNO：M20221884，保藏地址为：湖北省武汉市武汉大学。

2.权利要求1所述的尼可霉素高产菌株在产尼可霉素中的应用。

3.权利要求1所述的尼可霉素高产菌株的筛选方法，其特征是包括以下步骤：

步骤1从沙土管铲取适量刺孢吸水链霉菌(Streptomyces hygrospinosus)的沙土孢子，加入生理盐水，振荡分散，制成孢子悬液Ⅰ；

步骤2将步骤1制成的孢子悬液Ⅰ经梯度稀释，涂布于培养基平板上，恒温培养后长出单菌落Ⅰ；

步骤3单菌落Ⅰ培养到时间点1时，用打孔器打下步骤2中包含饱满合格单菌落形态的单菌块Ⅰ，移至无菌空培养皿中，间隔摆放，继续培养到时间点2；

步骤4将步骤3培养好的单菌块Ⅰ均匀分隔放置在生测平板上预筛，培养至出现清晰的抑菌圈后，测量各单菌块Ⅰ的抑菌圈直径，挑出抑菌圈直径最大的单菌块Ⅰ；

步骤5将步骤4挑出的单菌块Ⅰ保留上部未沾有指示菌的单菌块，刮下孢子，加入生理盐水，振荡分散，制成孢子悬液Ⅱ；

步骤6将步骤5制备的孢子悬液Ⅱ微波照射，保持黑暗或在红光下，用生理盐水梯度稀释，涂布于培养基平板上，恒温培养，长出单菌落Ⅱ；

步骤7用打孔器打下步骤6中包含饱满合格单菌落Ⅱ的单菌块Ⅱ，均匀分隔放置在生测平板上预筛，培养至出现清晰的抑菌圈后，测量各单菌块Ⅱ的抑菌圈直径，挑出抑菌圈直径最大的单菌块Ⅱ；

步骤8挑选步骤7抑菌圈直径较大的单菌落Ⅱ，接种到斜面培养基，恒温培养成初筛斜面；

步骤9将步骤8培养的初筛斜面初筛考核，即接入摇瓶种子瓶恒温振荡培养一定时间，再移种至摇瓶发酵瓶继续恒温振荡培养；

步骤10对步骤9的各发酵瓶发酵液中尼可霉素含量进行检测，筛选含量较高的菌株；

步骤11保藏步骤10选出的高产菌株；

步骤12将步骤11保藏的高产菌株接种到斜面培养基，恒温培养，即复筛斜面；

步骤13将步骤12培养的复筛斜面复筛考核，即接入摇瓶种子瓶恒温振荡培养一定时间，再移种至摇瓶发酵瓶继续恒温振荡培养；

步骤14对步骤13的各发酵瓶发酵液中尼可霉素含量进行检测，筛选含量较高的菌株；

步骤15保留步骤14选出的保藏的高产菌株，灭菌处理其他低产菌株。

4.根据权利要求3所述的尼可霉素高产菌株的筛选方法，其特征在于，所述步骤2中的筛选培养基包括以下成份：葡萄糖0.5—2.0％、天门冬素0.1—0.2％、K₂HPO₄ 0.01—0.10％、MgSO₄·7H₂O 0.01—0.10％、FeSO₄·7H₂O 0.001—0.003％、LiCl 0.1—0.5％、吖啶橙0.5—1.5％、琼脂1.0—2.0％，，其余为蒸馏水，所述筛选培养基的消前pH7.2—7.4。

5.根据权利要求3所述的尼可霉素高产菌株的筛选方法，其特征在于，所述步骤2的单菌落Ⅰ培养参数为温度25—30℃。

6.根据权利要求3所述的尼可霉素高产菌株的筛选方法，其特征在于，所述步骤3中的时间点1是单菌落Ⅰ按权利要求2所述的条件培养5—8天。

7.根据权利要求3所述的尼可霉素高产菌株的筛选方法，其特征在于，所述步骤3中的时间点2是单菌块Ⅰ从时间点1后算起按权利要求2所述的条件培养1—5天。