[发明专利]可视化运动发酵单胞菌、构建方法及应用

权利要求书

1.一种可视化运动发酵单胞菌，其特征在于，所述可视化运动发酵单胞菌为转入了发色基因eforRed的运动发酵单胞菌ZMNP，所述发色基因eforRed来自于Echinoporaforskaliana，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1或2所示；其中，如SEQ ID NO.2所示的基因为如SEQ ID NO.1所示基因的突变基因。

2.根据权利要求1所述的可视化运动发酵单胞菌，其特征在于，所述可视化运动发酵单胞菌转入了携带有发色基因eforRed的重组质粒。

3.根据权利要求2所述的可视化运动发酵单胞菌，其特征在于，所述重组质粒还携带有启动子，所述启动子选自四环素诱导型启动子Ptet、运动发酵单胞菌组成型启动子Pgap或运动发酵单胞菌组成型启动子Pgap-4S，所述Ptet、所述Pgap和所述Pgap-4S的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.3～5所示。

4.一种可视化运动发酵单胞菌的构建方法，其特征在于，包括：

构建重组质粒，所述重组质粒携带有来自于Echinopora forskaliana的发色基因eforRed和启动子组成的操纵子，所述发色基因eforRed的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述启动子选自四环素诱导型启动子Ptet、运动发酵单胞菌组成型启动子Pgap或运动发酵单胞菌组成型启动子Pgap-4S，所述Ptet、所述Pgap和所述Pgap-4S的核苷酸序列依次如SEQID NO.3～5所示；以及

将所述重组质粒转入运动发酵单胞菌ZMNP中。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述重组质粒的构建步骤包括：

将来自于Echinopora forskaliana的发色基因eforRed密码子优化后得到目的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

将启动子与目的基因片段连接成一个长片段；

将所述长片段与pEZ15A的载体骨架经吉布森装配反应后，转到大肠杆菌DH5α细胞感受态中，提取阳性克隆，即得到所述重组质粒。

6.一种可视化运动发酵单胞菌的构建方法，其特征在于，包括：

构建重组质粒，所述重组质粒携带有来自于Echinopora forskaliana的发色基因eforRed和启动子组成的操纵子的突变体，所述突变体中Echinopora forskaliana的发色基因eforRed突变后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述启动子为运动发酵单胞菌组成型启动子Pgap-4S，所述Pgap-4S的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.5所示；以及

将所述重组质粒转入运动发酵单胞菌ZMNP中。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述突变体的获得方法包括：

构建6个易错PCR反应体系和易错PCR反应程序；

以所述长片段为模板，依次按照所述6个易错PCR反应体系和易错PCR反应程序进行反应，以得到eforRed突变文库。

8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，还包括：

将所述eforRed突变文库与pEZ15A的载体骨架经吉布森装配后反应，转到大肠杆菌DH5α细胞感受态中，提取阳性克隆，即得到所述重组质粒。就是在写突变和筛选。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括：

将转入了所述重组质粒的ZMNP菌株于RMG5中培养，并对培养液进行荧光强度检测。

10.如权利要求1～3所述的可视化远动发酵单胞菌在乳酸、2-3丁二醇或异丁醇发酵生产中的应用。