[发明专利]一种N-甲酰基-L-亮氨酸中对映异构体的含量分析方法

说明书

本发明涉及一种N‑甲酰基‑L‑亮氨酸中对映异构体的含量分析方法，该方法包括：分别配置系统适应性溶液、供试品溶液以及对照溶液，按照空白溶液、系统适用性溶液、对照溶液、供试品溶液的序列顺序进样，要求色谱中异构体色谱峰及主峰的相互分离度均大于1.5；液相色谱仪的色谱条件为：采用蒸发光散射检测器；蒸发光散射检测器温度为35‑44℃，氮气流速为1.4‑2.5L/min，增益因子为1.4‑5.4。该分析方法解决了用衍生化方法转化不完全，较长的反应耗时，反应前复杂的配样、加热等操作程序，解决了衍生化方法准确性差的问题；同时操作简单、选择性好、灵敏度高。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，特别涉及一种N-甲酰基-L-亮氨酸中对映异构体的含量分析方法。

背景技术

氨基酸及其衍生物在医药领域应用非常广泛，许多医药API(原料药)分子结构中含有氨基酸衍生物结构片段，比如在抗感染药物中乙肝病毒药物核苷酸逆转录酶抑制剂富马酸丙酚替诺福韦中就含有丙氨酸异丙酯，靶点为NS5A抗乙肝病毒药物达卡他韦分子结构中就含有缬氨酸衍生物片段。而在减肥明星药奥利司他的分子结构中就含有L-亮氨酸的衍生物，为N-甲酰基-L-亮氨酸；它作为奥利司他API的重要合成起始物料，其含量与有关物质，尤其是其异构体的含量对医药API的质量控制有着重要的作用。

目前检测氨基酸的方法很多，对没有紫外吸收结构的氨基酸往往采用含苯环结构试剂，使用柱前衍生法、LC-MS/MS或集成安培法进行含量、有关物质及异构体检测。但由于N-甲酰基-L-亮氨酸及其对映异构体氨基已经甲酰基化，需要水解后再衍生，存在操作复杂、衍生不完全等问题；LC-MS/MS设备昂贵、操作复杂；集成安培法比较少见。因此，目前没有较好的、操作简便的分析检测方法以满足N-甲酰基-L-亮氨酸的对映异构体的含量测定。

发明内容

为了解决由于N-甲酰基-L-亮氨酸不具有紫外检测响应，其对映异构体含量测定较难通过衍生法来满足分析方法所要求的灵敏度、重复性及准确性等问题，本发明通过利用蒸发光检测器，并对其检测参数进行合理的设置，采用手性柱进行分离检测，可以准确的测出N-甲酰基-L-亮氨酸中对映异构体含量。该方法分析时间短、样品用量少、选择性好、灵敏度高、操作简单且易自动化，可以批量自动检测，准确度和精密度均可得到满意的结果。

本发明采用的技术方案如下：一种N-甲酰基-L-亮氨酸中对映异构体的含量分析方法，所述方法包括以下步骤：

1)系统适应性溶液的配制：

取N-甲酰基-D-亮氨酸对照品置于容量瓶中，加空白溶液超声溶解，并稀释至刻度，摇匀,作为N-甲酰基-D-亮氨酸储备液；

再次取N-甲酰基-L-亮氨酸对照品置于容量瓶中，并量取一定量的N-甲酰基-D-亮氨酸储备液，用空白溶液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

2)供试品溶液的配置：分别取两份供试品置于容量瓶中，加空白溶液超声溶解并稀释至刻度，摇匀；

3)对照溶液的配置：精密量取一定量供试品溶液置于容量瓶中，加空白溶液稀释；

4)N-甲酰基-L-亮氨酸中对映异构体的液相色谱检测：按照空白溶液、系统适用性溶液、对照溶液、供试品溶液的序列顺序进样，要求色谱中异构体色谱峰及主峰的相互分离度均大于1.5；

所述步骤4)中液相色谱仪的色谱条件为：采用蒸发光散射检测器；蒸发光散射检测器温度为35-44℃，氮气流速为1.4-2.5L/min，增益因子为1.4-5.4。

具体地，所述步骤4)记录色谱图后，N-甲酰基-L-亮氨酸中对映异构体含量的具体计算公式如下：