[发明专利]一种利用液质联用快速测定动物源性食品中黄霉素A的方法

说明书

本发明属于色谱检测技术领域，公开了一种利用液质联用快速测定动物源性食品中黄霉素A的方法。本发明将待测样品和提取试剂混合，涡旋混匀，离心取清液，得到待净化液；将水饱和正己烷加入待净化液中，涡旋混匀，离心，得到净化液，取净化液氮气吹干，用乙腈定容，过滤膜后得到待测液，采用超高效液相色谱‑串联质谱仪对净化液进行检测。本发明无需净化柱净化，操作简便，很好地改进了现有技术检测动物源性食品尤其是脂肪、蛋白质含量高的食品时存在基质效应大、灵敏度低等问题，具有理想的回收率和精密度，黄霉素A最低方法检出限为1.0μg/kg，不仅提高了检测的准确性，对于测定肉制品的意义重大可有效保证分析结果的重复性和重现性。

技术领域

本发明属于色谱检测技术领域，具体涉及一种利用液质联用快速测定动物源性食品中黄霉素A的方法。

背景技术

黄霉素(Flavomycin)又称默诺霉素、斑伯霉素、黄磷脂素(Flavophospholipol)或黄磷脂醇素、富乐霉素、富拉磷，世界卫生组织通用名为黄磷脂素(FV)。黄霉素是由灰绿链霉菌(斑伯链霉菌，Streptomyces bambergiensis)厌氧发酵产生的一种多组分磷酸糖脂类抗生素。黄霉素呈弱酸性，属于强极性化合物，易溶于水、甲醇、二甲基甲酰胺等小分子物质，不溶于苯类、三氯甲烷等其他有机溶剂；无明确熔点，200℃开始分解；在中性水和甲醇溶液中稳定，但在强酸和强碱条件下易失效。

作为国外上市最早的一种抗生素饲料添加剂，黄霉素曾是国外唯一允许在养殖业中使用的含磷糖脂类抗生素。它用量少却对牛、猪、鸡等动物促生长效果突出，提高饲料利用效率；可用于预防球虫病；黄霉素主要抑制革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌、链球菌和双球菌等，部分革兰氏阴性菌如巴氏杆菌、布氏杆菌等也对黄霉素敏感；与其他药物添加剂如维生素、氨基酸、微量元素等无配伍禁忌。这些显著优势使黄霉素广泛用于畜禽养殖、水产养殖。在美国，黄霉素被批准用于牛、猪和家禽，但使用水平应在0.5-20mg/kg，可以单独使用，也可以与莫能菌素、拉沙里菌素或盐霉素等离子载体抗生素联合使用，以提高增重率和饲料效率。

由于黄霉素通过抑制转糖酶活性，干扰细胞壁构成物质肽聚糖的生物合成，导致细胞裂解、死亡，达到很强的杀菌效果，欧盟曾授权在药理学剂量1-25mg/kg范围内允许将黄霉素添加使用于饲料中，但当发现黄霉素还具有显著的促生长作用时，本着预防原则，2005年欧盟农业部长会议决定，自2006年1月1日起，禁止在饲料中添加黄霉素，自2009年9月30日起黄霉素仅允许用于兔子饲养过程中。另有学者研究表明黄霉素可引起瘤胃细菌的适应性反应，从而显著改变其抗生素敏感性。黄霉素本身无抗原性，与其他常用的抗生素之间有无交叉抗原性有待深人研究。作为非代谢类药物，黄霉素经口服后几乎不被吸收，一方面可能在动物产品中残留，另一方面通过动物粪便会不可避免的排到环境中，容易污染土壤、地表水等环境，进而可能给人类安全带来威胁。长期食用黄霉素残留的动物源食品会破坏人体肠道菌群；对动物的骨骼发育有影响，大量摄入甚至会产生造血功能障碍；人在生产过程中接触黄霉素粗品易产生咳嗽、高烧、腹泻等不良过敏反应，其对动物及人体的其他危害还有待于深入研究。

黄霉素作为一种抗菌药物，也将不可例外地受到风险评估。目前检验检疫部门已将黄霉素列为饲料和动物源性食品残留监控计划。

现有研究表明黄霉素有五种活性成分A、A12、C1、C3、C4，皆具有类似的化学特性和抗菌活性。黄霉素中最主要的性组分为黄霉素A，占活性组分总和的相对量大于50％，一般在60-80％之间。我国规定黄霉素A的相对量应大于50％。因此，一般通过检测黄霉素A的含量可以间接计算样品中黄霉素的含量。

目前针对黄霉素A的检测技术主要有液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、离子对高效液相色谱法，测定对象多为饲料，个别为猪肉、禽类组织。