[发明专利]一种高频低强度磁刺激通过AC/cAMP/PKA通路上调LTP维持期的分析方法

权利要求书

1.一种高频低强度磁刺激通过AC/cAMP/PKA通路上调LTP维持期的分析方法，其特征是结合高频低强度磁刺激装置、电生理实验和ELISA方法，揭示了高频低强度磁刺激上调LTP维持期的作用机理，具体步骤是：

第1步、在高频低强度磁刺激装置设计上，磁刺激线圈外径为31.3mm，高度为6.3mm，缠绕的匝数为58匝，线圈紧密固定在玻璃电极的外部，首先通过SDG1020信号发生器输出70kHz正弦波信号，再经TDA7294功率放大器放大输出电流至0.6A，满足在磁刺激线圈上输出频率为70kHz，磁场强度为2mT的高频低强度磁场；

第2步、在电生理实验上，LTP由TBS和HFS两种诱导方式产生，其中，HFS为持续时间1s，频率为100Hz的脉冲序列，TBS由10个重复的脉冲序列组成，每个序列包含4个频率为100Hz的脉冲，每个脉冲的时间间隔为200ms；采用多电极阵列系统记录离体海马脑片Schaffer-CA1通路的fEPSPs振幅变化，首先记录基线10min，LTP诱导成功后，继续记录15min的LTP后，分别施加3种外界干预：(1)仅施加高频低强度磁刺激3min后，继续记录15min的LTP；(2)分别加入0.03mM和0.05mM的NMDARs拮抗剂DAP5，记录15min的LTP后，再施加高频低强度磁刺激3min后，继续记录15min的LTP；(3)分别加入0.03mM，0.05mM，0.07mM，0.10mM 4种浓度的cAMP抑制剂DDA，记录15min的LTP后，再施加高频低强度磁刺激3min后，继续记录15min的LTP；

第3步、在ELISA方法上，电生理实验记录成功后，将离体海马脑片经漂洗、称重后，在匀浆玻璃管中充分研碎，制成匀浆液，使用L-550台式低速离心机以3000r/10min转速进行离心，取上清，冻存于-20℃的MDF-U339低温冰箱中，采用ELISA试剂盒测定样本中的cAMP浓度和AC1，AC6，AC8，PKA的酶活性；

第4步、在作用机理上，高频低强度磁刺激对HFS与TBS诱导的LTP均有不同程度的上调，但对HFS-LTP的上调效果明显强于TBS-LTP；在TBS组中，cAMP浓度、三种AC和PKA的酶活性在磁刺激前后变化均不显著；在HFS组中，0.03mM DAP5或0.05mM DDA的添加，均可完全抵消磁场对LTP的上调效果，cAMP浓度和PKA的酶活性在经过磁场处理后均较控制组上调，AC6酶活性在磁刺激后下降，AC1与AC8的酶活性在磁刺激后均上调，其中AC1在海马中含量较低，AC8含量较高；以上结果可以说明，高频低强度磁刺激通过AC/cAMP/PKA通路上调LTP维持期。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，实验对象为SD大鼠离体海马脑片Schaffer-CA1区。