[发明专利]Diego血型DI*A等位基因的双重TaqMan荧光定量PCR检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开一种Diego血型DI*A等位基因的双重TaqMan荧光定量PCR检测试剂盒。所述试剂盒特异性强、灵敏度高，操作简便快速，结果判读简单方便，从而可实现临床Diego血型的快速检测。对于血站或临床检验科室而言，实时荧光PCR技术既做到了操作简便，同时成本低、结果判读快，在众多基因分型方法中，无疑是临床最适用的血型快速检测技术。而基于TaqMan探针的荧光定量PCR技术特异性强灵敏度高，因此本发明建立了双重TaqMan荧光定量PCR方法检测DIA等位基因。

技术领域

本发明涉及基因诊断试剂盒技术领域，具体讲是一种Diego血型DI*A等位基因的双重TaqMan荧光定量PCR检测试剂盒及其应用。

背景技术

Diego血型系统由22种抗原组成，其中Di^a和Di^b是最具临床意义的。两者均可引起新生儿溶血性疾病和溶血性输血反应。但特异性商业抗体的获取有限，使得为抗-Di^b受体筛选Di(a+b-)即DI*A/DI*A供体变得困难。这一需求促使我们寻找抗原检测的替代方法，并选择相应阴性的血液单位。

除了ABO和RhD之外，大多数血型抗原都是由单核苷酸多态性(SNPs)产生的，这使得基因分型方法相对简单。例如，DI*A和DI*B多态性是由SLC4A1基因19外显子C.2561位点的T＞C核苷酸取代决定的，将条带3蛋白中854位点的亮氨酸改变为脯氨酸。通过这种单核苷酸多态性的基因分型，可以可靠地推导出血型表型。

目前的已应用到Diego血型基因分型的技术包括PCR-SBT法、PCR-SSP法、PCR-SSOP法。PCR-SBT法，主要不足是对仪器和试剂有特殊要求，不易普及、操作复杂、成本相对较高、速度慢、通量底。PCR-SSP法，需通过琼脂糖凝胶电泳分析，操作复杂且容易污染。PCR-SSOP法，虽然灵敏度高，特异性较强，结果直观，但操作比较繁琐，耗时较长，难以标准化和自动化。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种Diego血型DI*A等位基因的双重TaqMan荧光定量PCR检测试剂盒。所述试剂盒特异性强、灵敏度高，操作简便快速，结果判读简单方便，从而可实现临床Diego血型的快速检测。

本发明的第一个目的是提供一种Diego血型DI*A等位基因的双重TaqMan荧光定量PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括正向引物Dia-s、反向引物Dia-as以及TaqMan探针Dia-probe；还包括正向引物Bactin-S、反向引物Bactin-AS以及TaqMan探针Bactin-probe；

所述正向引物Dia-s的核苷酸序列SEQ ID NO.1如下所示：

5’-GTGGGTGGTGAAGTCCAATCT-3’；

所述反向引物Dia-as的核苷酸序列SEQ ID NO.2如下所示：

5’-AGAGGGTCTGGCTGTCTTGAA-3’；

所述TaqMan探针Dia-probe的核苷酸序列SEQ ID NO.3如下所示：

5’-FAM-TCTGGCCTGCTGTGTCCTAGCATATGATC-BHQ1-3’；

所述正向引物Bactin-S的核苷酸序列SEQ ID NO.4如下所示：

5’-CTCTGCCTGACATGAGGGTTA-3’；

所述反向引物Bactin-AS的核苷酸序列SEQ ID NO.5如下所示：

5’-TCACCTTCACCGTTCCAGTTT-3’；

所述TaqMan探针Bactin-probe的核苷酸序列SEQ ID NO.6如下所示：