[发明专利]一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法

说明书

本发明属于癌症治疗领域，提供了具体涉及一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法。本发明提供的shRNA包括shHTOMM22#1或shHTOMM22#2，shRNA抑制载体包括上述的shRNA和基础载体。shRNA抑制载体的制备方法包括以下步骤：将shRNA的正向引物和反向引物混合，退火，得到双链寡核苷酸；酶切基础载体得到敲低载体；将所述双链寡核苷酸和所述敲低载体进行连接，得到所述shRNA抑制载体。本发明通过在肝癌细胞中敲低TOMM22的表达，显著抑制癌细胞增殖；通过裸鼠成瘤实验，确定TOMM22的敲低对肿瘤生长具有显著抑制效果。

技术领域

本发明属于癌症治疗技术领域，具体涉及一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法。

背景技术

肝癌是导致病人死亡的恶性肿瘤之一，其恶性程度高，在我国肝癌死亡率仅次于胃癌，居我国恶性肿瘤死亡率第二位。据统计，我国每年新增肝癌人数30万人，而每年肝癌死亡人数达11万。

因此，寻找有效且副作用和缓的抗癌物质就显得更为迫切。

目前，已经公开的针对Hep3b的治疗方法包括：使用棕榈酸作为人肝癌细胞株Hep3B，LM3的生长抑制剂；使用吡咯并嘧啶酯Ⅰ、吡咯并嘧啶酯Ⅱ和吡咯并嘧啶酯Ⅲ抑制肝癌Hep3b细胞中LncRNA CCAT1的表达；使用异戊烯基黄酮类化合物对Hep3B细胞具有细胞毒作用和促凋亡作用，从而抑制其表达；使用千金藤素抑制HepG2、Hep3B和Huh7的增殖以及使用辛伐他汀和博舒替尼作为肝癌细胞抑制剂的方法。

通过WB、RT-qPCR和免疫组化对临床肝癌样本分析中发现，在肝癌中TOMM22表达量显著高于正常组织，并且TOMM22的表达量同生存率呈负相关，因此，猜想，TOMM22的异常高表达会促进肝癌的进程。通过siRNA敲低TOMM22可能会抑制肝癌细胞的生长，进而有望成为治疗肝癌的药物。

但是现有技术中，并未发现有针对TOMM22表达的研究，如其可以适用于肿瘤生长的抑制，则对于本领域具有积极的意义。

发明内容

本发明的一个目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供的一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法。

为了实现上述目的，本发明首先提供了一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法，使用抑制TOMM22表达的shRNA抑制肿瘤，所述shRNA为shHTOMM22#1或shHTOMM22#2；

所述shHTOMM22#1的正向引物如SEQ ID NO.1所示,所述shHTOMM22#1的反向引物如SEQ ID NO.2所示；

所述shHTOMM22#2的正向引物如SEQ ID NO.3所示,所述shHTOMM22#2的反向引物如SEQ ID NO.4所示；

SEQ ID NO.1

CCGGGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGCTTTTTG；

SEQ ID NO.2

AATTCAAAAAGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGC；

SEQ ID NO.3

CCGGCGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACGTTTTTG；

SEQ ID NO.4

AATTCAAAAACGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACG。