[发明专利]一种兔用冻精稀释液和冻存兔精液的方法

说明书

本发明提供了一种兔用冻精稀释液和冻存兔精液的方法，属于人工授精技术领域。该兔用冻精稀释液包括以下成分：三羟甲基氨基甲烷，柠檬酸，葡萄糖，蔗糖，抗生素，二甲基亚砜，蛋黄，水和pH调节剂。该冻存兔精液的方法包括以下步骤：在兔精液中加前述的兔用冻精稀释液得到混合液，分装，平衡，冻存。本发明提供的兔用冻精稀释液和冻存兔精液的方法能够用于低温冻存兔精液，并能有效减少冻存时低温对精液的损伤，提高复苏时精子的活力及母兔受胎率，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于人工授精技术领域，具体涉及一种兔用冻精稀释液及其制备方法，以及一种冻存兔精液的方法。

背景技术

在生命科学、人类医药和健康研究领域，实验动物在生命活动中的生理和病理过程，与人类或异种动物都有很多相似之处，并可互为参照。为了保证动物实验更科学、准确和重复性好，可以用各种方法把一些需要研究的生理或病理活动相对稳定地显现标准化的实验动物身上，供实验研究之用。这些标准化的实验动物就称之为模式动物。兔作为一种常用的模式动物，在生殖生理及胚胎学研究、免疫学研究、心血管疾病及肺心病研究、传染病学研究及转基因疾病动物模型建立等生物医学领域研究上都起到了十分重要的作用。

人工授精技术是实现规模化养兔的重要手段，在生产上能达到同期配种、同期分娩、同期出栏的目标。该技术首先需要采集种公兔精液，对精液品质进行检查，再用稀释液稀释，最后将精液输入到发情母兔生殖道内，代替自然交配。人工授精技术可以增加精液使用效率，减少公兔饲养数量，减少疾病的传播，提高母兔的受胎率。

精液的冷冻保存可以延长特定精子的使用时长，发挥着重要作用。但是，精子对低温非常敏感，冷冻保存过程中细胞内冰晶的形成是影响解冻后精子质量的主要原因，其会导致精液解冻后精子活力降低，因此冻精稀释液的选择非常重要。目前，猪、马、牛、羊等精液的冻精稀释液研究较多，产品已完全商品化，但兔精液的冻精稀释液研究较少。目前市场上兔精液的冻精稀释液的商品化产品几乎没有，且质量参次不齐，精子复苏后活力不高，很难有效开展人工授精生产繁殖工作。

专利申请CN114009427A公开了一种兔精液冷冻保存稀释液和制备方法，该兔精液冷冻保存稀释液以水作为溶剂，所述兔精液冷冻保存稀释液中，每100mL水添加：三羟甲基氨基甲烷3～4g、柠檬酸1～2g、葡萄糖0.5～1g、海藻糖2～3g、L-谷氨酸0.5～1g、二甲基亚砜10～20mL和甘油2～4mL；所述兔精液冷冻保存稀释液的pH值为6.5～7.5。该稀释液能够在一定程度上提高冷冻后精子的活力，但是，利用该稀释液低温冻存兔精液时，仍然会对兔精液造成损伤，复苏时精子的活力有待进一步提高。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的第一个目的在于提供一种用于低温冻存兔精液，并能有效减少冻存时低温对精液的损伤，提高复苏时精子的活力及母兔受胎率的兔用冻精稀释液。

本发明的第二个目的在于提供一种冻存兔精液的方法，旨在推广兔冷冻精液技术在生产科研工作上的应用。

本发明提供了一种兔用冻精稀释液，它包括以下成分：三羟甲基氨基甲烷，柠檬酸，葡萄糖，蔗糖，抗生素，二甲基亚砜，蛋黄，水和pH调节剂；

其中，三羟甲基氨基甲烷的浓度为1.800～2.000g/50mL，柠檬酸的浓度为0.950～1.250g/50mL，葡萄糖的浓度为0.325～0.725g/50mL，蔗糖的浓度为0.25～0.65g/50mL，抗生素的浓度为0.002～0.006g/50mL，二甲基亚砜的浓度为1～8ml/50mL，蛋黄的浓度为5～15ml/50mL。

进一步地，所述抗生素为卡那霉素。

进一步地，所述三羟甲基氨基甲烷的浓度为1.850～1.950g/50mL，柠檬酸的浓度为0.950～1.00g/50mL，葡萄糖的浓度为0.4～0.6g/50mL，蔗糖的浓度为0.35～0.55g/50mL，卡那霉素的浓度为0.003～0.005g/50mL，二甲基亚砜的浓度为3～5ml/50mL，蛋黄的浓度为7～12ml/50mL。