[发明专利]一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体及其制备方法和应用。本发明首先构建了过表达CXCR6的质粒并将其转染至293T细胞中，使293T细胞膜表面过表达CXCR6，最后提取293T细胞膜作为药物载体，从而构建通过CXCR6靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体（Membranesupgt;CXCR6/supgt;）。Membranesupgt;CXCR6/supgt;可进一步负载抗炎药物。本发明有助于推动相关靶向抗炎药物的制备，提高骨性关节炎相关药物的疗效，并为新药物研发提供线索。

技术领域

本发明涉及生物医用领域，尤其涉及一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体及其制备方法和应用。

背景技术

膝骨关节炎（Osteoarthritis，OA）是老年人群中常见的关节退行性疾病，导致下肢功能障碍，极大地影响患者的生活质量。目前正逐步进入老龄化社会，65岁及以上人群膝OA的患病率约为50.0%，而在75岁及以上人群中，膝OA的患病率则达到80.0%，将面对巨大的OA患者的社会经济压力。然而目前并没有针对OA的特效药物，晚期OA患者只能接受手术治疗。

OA被认为是一种“全关节疾病”，其病变包括软骨退变磨损、半月板变形、韧带撕裂、软骨下骨硬化以及滑膜组织的炎症等。滑膜组织炎症是OA的典型表现，包括关节周围红、肿、热、痛。关节软骨出现形态学改变之前，滑膜组织已存在明显的炎症反应，巨噬细胞是滑膜组织中的主要炎症反应细胞，滑膜组织炎症刺激巨噬细胞产生MMP13、ADAMTS5降解软骨加剧OA进展；另外，巨噬细胞分泌大量可溶性促炎因子，包括IL-1β，TNF-α等，作用于滑膜细胞、免疫细胞等，进一步加重关节内的炎症反应，招募更多的巨噬细胞，从而形成关节内炎症反应的恶性循环。因此，靶向OA早期滑膜巨噬细胞，是延缓OA进展的有效途径。

单细胞转录组测序结果显示，在OA的进展过程中，滑膜中巨噬细胞大量增加，并特异性高表达CXCL16，而CXCL16可以表达于细胞膜表面，并与CXCR6特异性结合，因此，本发明通过构建过表达CXCR6质粒，并将此质粒转染至293T细胞中，使293T细胞膜表面高表达CXCR6，提取该细胞膜作为药物载体（Membrane^CXCR6），可达到靶向CXCL16+巨噬细胞的目的，Membrane^CXCR6可进一步负载抗炎药物，从而制备靶向巨噬细胞抗炎药物，减轻膝关节内炎症反应及OA进展。

发明内容

本发明的目的是提出一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体及其制备方法和应用，以解决现有技术中的膝骨关节炎缺乏特异性靶向抗炎药物的问题，同时提供了一种新的膝关节滑膜组织炎症的治疗靶点。

本发明的目的将通过以下技术方案得以实现：

本发明一方面提供了一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、构建过表达CXCR6的重组质粒；

步骤2、将步骤1得到的重组质粒转染至293T细胞中，使293T细胞膜高表达CXCR6；

步骤3、提取293T细胞膜作为药物载体，得到靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体Membrane^CXCR6。

进一步的，所述步骤1具体包括：

以初始骨架载体pKD-EF1a-IRES2-Puro为基础，将标签基因HA和绿色荧光基团EGFP以PCR方法扩增，构建pKD-EF1a-HA-EGFP-IRES2-Puro空载质粒；

pKD-EF1a-HA-EGFP-IRES2-Puro经限制性内切酶BamH I和EcoR I 双酶切后回收，DNA重组连接酶将小鼠CXCR6基因插入到线性化的空载质粒上，构建pKD-EF1a-HA-EGFP-mCXCR6-IRES2-Puro重组质粒。

进一步的，所述步骤2具体包括：

进行慢病毒包装，将步骤1得到的重组质粒转染入293T细胞中，使293T细胞膜表面过表达CXCR6。