[发明专利]一种检测嗜麦芽窄食单胞菌的LAMP引物组及其应用

权利要求书

1.一种检测嗜麦芽窄食单胞菌的LAMP引物组，其特征在于：包括，

外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

内引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

内引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.如权利要求1所述检测嗜麦芽窄食单胞菌的LAMP引物组，其特征在于：所述所述LAMP引物组还包括环状加速引物LB，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

3.权利要求1所述检测嗜麦芽窄食单胞菌的LAMP引物组在制备检测嗜麦芽窄食单胞菌的试剂盒中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述试剂盒包括引物组混合物，所述引物组混合物包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP和环状加速引物LB。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述引物组混合物，包括如下体积份计的组分：

外引物F3和B3均为1～2份，内引物FIP和BIP均为8～10份，环状引物为14～16份。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述试剂盒中外引物F3、B3的使用浓度均为8～10μM，所述内引物FIP、BIP的使用浓度为64～80μM，所述环状引物LB的使用浓度为8～10μM。

7.如权利要求4～6中任一所述的应用，其特征在于：所述试剂盒还包括，反应液、甜菜碱、阳性对照、阴性对照品；其中，

所述反应液包括Bst大片段DNA聚合酶、荧光染料Eva Green、dNTPs、Tris-Hcl、KCl、MgSO₄、(NH₄)₂SO₄和ddH₂O。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述甜菜碱摩尔浓度为3～5mol/L、阴性对照品为1xTE缓冲液。

9.一种检测嗜麦芽窄食单胞菌的方法，其特征在于：包括，

提取待检样品中的DNA作为环介导恒温扩增LAMP反应体系的模板；

将DNA模板、反应液、甜菜碱和引物组混合液进行混合，得到最终的扩增液；

将扩增液进行PCR恒温扩增。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：PCR恒温扩增反应的温度为65℃，反应时间为50min。