[发明专利]一种检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的LAMP引物组及其应用在审
| 申请号： | 202310299392.5 | 申请日： | 2023-03-24 |
| 公开（公告）号： | CN116287347A | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 胡江;韩克兵;张迅;肖可;王磊;罗杰;周泽波;周庭波;陈汉柒;张思宇;代艺虹 | 申请（专利权）人： | 贵州金玖生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12N15/11;C12Q1/6844;C12R1/01 |
| 代理公司： | 南京禹为知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32272 | 代理人： | 刘峰 |
| 地址： | 550002 贵州省贵阳*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 呼吸道 病原微生物 不动 杆菌 lamp 引物 及其 应用 | ||
1.一种检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的LAMP引物组，其特征在于：包括，
外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
内引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
内引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.如权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述LAMP引物组还包括，
环状加速引物LF，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；
环状加速引物LB，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
3.权利要求1或2所述引物组在制备检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌试剂盒中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述试剂盒包括反应液、甜菜碱、阴性对照品和引物组混合物。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述引物组混合物，其中，外引物F3、B3的使用浓度为10μM，所述内引物FIP、BIP的使用浓度为100μM，所述环状加速引物LF、LB的使用浓度为10μM。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述反应液包括Bst大片段DNA聚合酶、荧光染料EvaGreen、dNTPs、Tris-HCl、KCl、MgSO4、(NH4)2SO4和ddH2O。
7.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述阴性对照品为1xTE缓冲液。
8.一种检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的方法，其特征在于：包括，
提取待检样品中的核酸基因组作为环介导恒温扩增LAMP反应体系的模板；
配置LAMP反应体系总体积为25μl，其中具体的LAMP反应体系为：环介导恒温反应液为12.5μl，外引物F3、B3分别加入0.5μl、0.5μl；
内引物FIP、BIP分别加入0.4μl、0.4μl；
环状引物LF、LB各加入2μL；
待检样品中提取的DNA模板加入2.2μl，阴性对照样本为1XTE缓冲液；ddH2O加入4.5μl补足至25μl。
9.如权利要求4所述的方法，其特征在于：LAMP反应的条件为在63℃下恒温反应60min。
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