[发明专利]一种细胞模型、其构建方法、细胞、其制备方法及应用

说明书

本发明属于生物领域，具体涉及一种细胞模型、其构建方法、细胞、其制备方法及应用，该细胞模型为包括HPV 31环状全基因组DNA与质粒的HaCaT细胞，本申请构建了HPV31感染模型，为研究HPV全基因组对宿主细胞的影响提供了有利条件，为研究HPV复制机制提供了新模型，为研究HPV基因组与宿主因子间的相互作用提供了较稳定的细胞模型。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种细胞模型、其构建方法、细胞、其制备方法及应用。

背景技术

HPV是一种在全球分布十分广泛的病毒，HPV的持续感染与多种肿瘤的发生发展密切相关，研究表明，与HPV感染相关的肿瘤数量多，种类广泛，例如，HPV感染与所有肛门鳞状细胞癌，所有肛门鳞状细胞癌，77.77％阴道癌，52.9％阴茎癌，31％口咽癌，25％外阴癌，2.1％口腔癌，2.7％喉癌相关。虽然，疫苗接种目前被认为是减少HPV感染的有效策略，但目前HPV疫苗均为根据L1蛋白研发的预防性重组蛋白疫苗，而病毒通常易发生变异且HPV致癌是个长期过程，因此，疫苗的长期有效性仍不能准确估计。同时重组蛋白疫苗对运输，保存等要求较高，费用高等问题，导致HPV疫苗在一些低收入和中收入的国家推广受限，而这些国家也是HPV感染相关疾病负担最重的国家。

HPV 31是一类高危型人乳头瘤病毒，在全球范围广泛流行，其主要所致的疾病为“宫颈上皮内瘤”和“宫颈癌”。目前，国内对HPV 31的研究主要集中在某些单个蛋白对宿主的影响，但对全基因组如何复制或是全基因组进入细胞后对细胞是怎样的影响研究极少，然而，在国内针对HPV流行病学的报道均表明，HPV 31与高级别鳞状上皮病变相关，而目前单个蛋白对宿主的影响不足以完全解释HPV 31的致病及复制机制。

因此，有必要构建一种新的HPV 31感染细胞模型，以研究HPV 31在上皮细胞内的复制情况。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种细胞模型、其构建方法、细胞、其制备方法及应用。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

第一个方面，本申请提供一种细胞模型，所述细胞模型为包括HPV 31环状全基因组DNA与质粒的HaCaT细胞。

进一步地，所述质粒采用pSV2-Neo质粒。

进一步地，所述HPV 31环状全基因组DNA与质粒的质量比为2-4：1。

第一个方面，本申请提供如上所述的细胞模型的构建方法，所述构建方法包括：

将HPV 31环状全基因组DNA与质粒转入HaCaT细胞中进行转染，随后持续加入遗传霉素进行筛选，筛选完成停止加入遗传霉素，即得所述细胞模型。

进一步地，所述HPV 31环状全基因组DNA通过包括以下步骤在内的方法制备而得：

对pMINI-HPV31质粒进行酶切，接着用连接酶进行环化，即得所述HPV 31环状全基因组DNA。

进一步地，采用HindIII限制性内切对pMINI-HPV31质粒进行酶切。

进一步地，所述连接酶为T4连接酶。

进一步地，所述转染的时间为48h。

进一步地，所述筛选的时间为10-14天。

第三个方面，本申请提供一种细胞的制备方法，所述制备方法包括：

将HPV 31环状全基因组DNA与质粒转入HaCaT细胞中进行转染，随后加入遗传霉素进行筛选，筛选完成停止加入遗传霉素，接着将筛选得到的细胞进行单克隆培养，即得所述细胞。

第四个方面，本申请提供一种根据如上所述的制备方法制得的细胞。