[发明专利]一种肾素磁微粒化学发光检测试剂盒、制备方法及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种肾素磁微粒化学发光检测试剂盒、制备方法及应用，本发明试剂盒包含一种对肾素和活性位点开放的肾素原具有较高的反应活性，而对活性位点关闭的肾素原无反应活性的抗肾素活性位点抗体，极大提高了对“活性肾素”的检测特异性，同时本发明试剂盒对肾素和活性位点开放的肾素原还具有较高的检测灵敏度、准确度、精密度，以及较低的检测限。

技术领域

本发明属于磁微粒化学发光检测试剂盒技术领域，具体涉及一种肾素磁微粒化学发光检测试剂盒、制备方法及应用。

背景技术

肾素(Renin)，也被称为血管紧张素原酶，是肾小球旁器(也称球旁复合体)的球旁颗粒细胞释放的一种蛋白水解酶，能催化血管紧张素原转化为血管紧张素I，是肾素-血管紧张素-醛固酮系统的组成部分。正常人体内肾素的含量较低，主要以肾素原的形式存在，肾素原包括有活性的肾素原和无活性的肾素原，其中有活性的肾素原含量仅为无活性的肾素原含量的十分之一。肾素原较肾素多66个氨基酸，正常生理条件下，肾素原的活性结合位点处于关闭状态，不具有催化能力。当动脉血压降低、循环减少、交感神经兴奋时，肾素原在内肽酶的作用下被激活为开放的肾素原或肾素，两者活性位点均被打开，具有生理活性。肾素分泌后经肾静脉进入血液，能催化肝脏分泌进入血浆中的血管紧张素原转变成血管紧张素I，血管紧张素I形成几秒钟之内，被血液和肺组织中的血管紧张素转换酶降解，生成血管紧张素II，血管紧张素II刺激肾上腺皮质球状带分泌的醛固酮的量增加、增加肾小管对NaCl和水的重吸收。血管紧张素II还可被氨基肽酶水解为血管紧张素III。这三种血管紧张素均有生物活性，其中血管紧张素II、III的生物活性较强，而后者在血浆中的浓度较低，故以血管紧张素II的生物活性最强。血管紧张素原和转换酶等经常存在于血浆中，而“活性肾素”(本文指代肾素和活性位点开放的肾素原，下同)的释放是决定血浆中血管紧张素浓度的关键性条件，其对调节人体血压及钾钠离子的代谢和肾脏的正常生理功能具有重要的作用。

肾素作为原发性醛固酮增多症最常用筛查指标之一，已广泛应用于临床，特别是门诊开展肾素含量的测定可以很大程度上提高该病检出率使部分患者得到早期诊断和治疗。

现有市面上针对肾素的检测方法主要为两种，分别为肾素活性和肾素浓度，肾素活性检测为传统方法，其原理为通过测定单位时间单位体积内血管紧张素原转变为血管紧张素I的数量从而间接测定血浆中的活性肾素水平，其会受血管紧张素原浓度、样品预处理、培养时间、pH值或其他因素的影响，从而导致不同的操作人员、不同厂商的检测试剂之间的检测结果差异很大。肾素浓度的检测为近年来新建立起来的检测肾素含量的方法，该方法不受血管紧张素原浓度的影响，操作简便，检测速度快，能实现高通量检测，稳定性和重复性好，易于标准化。

肾素浓度的检测是采用抗原抗体之间的特异性反应原理，常见的检测方法有酶联免疫吸附法、放射免疫分析法和化学免疫分析发光法。但考虑到肾素在人体内的含量极低，目前临床上使用的肾素检测试剂盒普遍存在灵敏度偏低，低值样本之间肾素含量检测无区分，同时受限于针对“活性肾素”特异性抗体的开发难度，绝大部分肾素检测试剂中用到的抗体大多是针对总肾素(包含肾素及活性位点开放肾素原和活性位点关闭肾素原)的抗体，而非针对肾素和活性位点开放肾素原的抗体。而在人体内无活性肾素原的含量远高于肾素和有活性的肾素原，且无活性肾素原对肾脏功能评价及相关疾病的鉴别诊断并无帮助作用，因此如采用针对总肾素的抗体进行检测，会导致对“活性肾素”的检测造成干扰，从而影响肾素测定结果在临床应用上的准确性。截止目前市场上缺乏灵敏度高、能够准确检测“活性肾素”的肾素检测试剂，尤其是低值样本测试结果稳定且精密度高的全自动化检验试剂。

肾素能够调节人体血压及钾钠离子的代谢和维持肾脏的正常生理功能，同时也在原发性醛固酮增多症、肾脏功能评价等疾病的预防监控和治疗方面存在着巨大的应用潜力。为了克服现有检测技术中存在的固有缺陷，建立一种灵敏度满足要求、能够对“活性肾素”进行精确检测且能实现大批量检测肾素的方法学是非常有必要的。

发明内容