[发明专利]一种表达HSP70的重组乳酸菌及其制备方法与应用

说明书

本发明属于基因工程及分子免疫学技术领域，具体涉及一种表达HSP70的重组乳酸菌及其制备方法与应用。该重组乳酸菌以乳酸菌作为活载体，表达HSP70蛋白，既能发挥乳酸菌的益生功能，又能发挥功能性蛋白(HSP70蛋白)在鱼类黏膜防御系统中关键调节作用，阻断小瓜虫感染，提高乳酸菌的抗小瓜虫感染的生态防病效果。

技术领域

本发明属于基因工程及分子免疫学技术领域，具体涉及一种表达HSP70的重组乳酸菌及其制备方法与应用。

背景技术

多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis,Ich)属于纤毛虫纲、膜口目、凹口科、小瓜虫属，几乎能感染所有的淡水鱼类，分为掠食体、包囊前体、包囊和滋养体阶段，其中掠食体钻入鱼类皮肤表面后，分解鱼体表面黏液和上皮组织为食，可以造成鳞片基部和鳃盖处发生局灶性出血，并在真皮层中积聚血细胞和炎性结节。小瓜虫入侵鱼类表皮后，周围的白细胞和炎性细胞不仅没有诱导免疫保护，还被寄生虫摄取，导致炎症细胞的数量减少了，进而造成更加严重的继发性感染，也为小瓜虫病的防控带来巨大困难。因此，发病后常常引发鱼群大规模死亡并造成了巨大的经济损失。目前小瓜虫病的防治方法主要有物理方法和化学方法，但均不能对小瓜虫感染发挥有效控制作用。因此研制既能够确保水产品质量安全、环境友好，且操作简便、易于应用的绿色渔药，是促进我国水产养殖健康发展的当务之急。

发明内容

本发明第一方面的目的，在于提供一种重组乳酸菌。

本发明第二方面的目的，在于提供本发明第一方面的重组乳酸菌的制备方法。

本发明第三方面的目的，在于提供本发明第一方面的重组乳酸菌的应用。

本发明第四方面的目的，在于提供一种产品。

为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供一种重组乳酸菌，所述重组乳酸菌包含HSP70蛋白的编码基因，所述HSP70蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的HSP70蛋白。

优选地，所述编码基因的序列如SEQ ID NO.3所示。

优选地，所述乳酸菌选自乳球菌亚种、链球菌亚种、乳杆菌亚种、明串珠菌亚种、片球菌亚种、短杆菌亚种以及丙酸杆菌亚种。

优选地，所述乳酸菌包含乳酸乳球菌；进一步包含乳酸乳球菌NZ9000。

优选地，所述重组乳酸菌的名称为pNZ8148-HSP70/L.lactis，保藏于位于中国武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2023年2月27日；保藏编号是CCTCCNO：M2023213，分类命名为：Lactococcus lactis pNZ8148-HSP70(乳酸乳球菌pNZ8148-HSP70)。

本发明的第二个方面，提供本发明第一个方面的重组乳酸菌的制备方法，将HSP70蛋白的编码基因导入乳酸菌中。

优选地，所述HSP70蛋白的编码基因通过重组载体导入乳酸菌。

优选地，所述重组载体为将所述HSP70蛋白的编码基因插入表达载体的多克隆位点后得到的载体。

优选地，所述表达载体可为现有技术中常见的表达载体，例如：pNZ8148、pNZ8048、pNZ9530、pNZ8149、pLEISS、pNZ2013、pNZ2103、pLEB590、pNZ8112、pIAβ5、pW425e t、pW425t、pW425等。

优选地，所述表达载体为pNZ8148。

优选地，所述导入的方式为电转化。

本发明的第三个方面，提供本发明第一个方面的重组乳酸菌在制备产品中的应用；所述产品具有c1)～c2)中至少一种功能：