[发明专利]尿激酶特征多肽组及检测尿激酶掺假的方法

权利要求书

1.尿激酶特征多肽组，其特征在于，所述特征多肽组可用于区分来源于人和家畜动物的尿激酶；所述特征多肽组由特征多肽1和特征多肽2组成；其中特征多肽1的氨基酸序列为FEVENLILHK，特征多肽2的氨基酸序列为SDALQLGLGK。

2.一种利用权利要求1所述尿激酶特征多肽组检测尿激酶掺假的方法，其特征在于，采用以下步骤：

（1）取待测样品溶解，进行酶解灭活后作为供试品溶液；

（2）水经过酶解处理，制备空白溶液；

（3）取步骤（1）所制备的供试品溶液及步骤（2）所制备的空白溶液注入液相色谱-质谱仪，采用电喷雾正离子模式，进行多反应监测，以质荷比m/z 621.35→284.17及621.35→397.25作为特征多肽1的检测离子对，出峰时间为5.9 min，以质荷比m/z 501.28→374.24及501.28→274.10作为特征多肽2的检测离子对进行测定，特征多肽2出峰时间为5.2 min；当同时在保留时间5.9 min和5.2 min，有色谱峰出现，则待测样品中同时含有特征多肽1和特征多肽2；

步骤（3）中，所述液相色谱-质谱仪中液相和质谱检测条件中，液相条件为：WatersACQUITY UPLC BEH C₁₈ 色谱柱的柱长度为50 mm，直径为2.1 mm，填料粒径为1.7 μm；流动相A：0.1%甲酸溶液流动相，B：0.1%甲酸乙腈；按下表进行梯度洗脱；柱温：40℃；进样量：2 μL；流速：0.3 mL/min；

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3.根据权利要求2所述的检测尿激酶掺假的方法，其特征在于，步骤（2）的具体操作为：

①待测样品溶解：待测样品用25 mM碳酸氢铵配制为浓度1 µg/µL；

②酶解：取步骤①溶解后样品100 µL，加1 µg蛋白酶于37℃过夜酶解，酶解结束后灭活；

③离心：最后取步骤②酶解灭活的样品，12000 rpm离心10 min，取上清液即得待测样品。

4.根据权利要求3所述的检测尿激酶掺假的方法，其特征在于，所述的蛋白酶为胰蛋白酶。

5.一种权利要求1所述的尿激酶特征多肽组的应用，其特征在于，所述特征多肽组可用于含有尿激酶药剂的来源鉴别。