[发明专利]香菇0912品种交配型鉴定引物及其应用

说明书

本发明公开了香菇0912品种交配型鉴定引物及其应用。本发明提供了成套引物对，由引物对A1(SEQ ID No.1和SEQ ID No.2)、引物对A2(SEQ ID No.3和SEQ IDNo.4)、引物对B1(SEQ ID No.5和SEQ ID No.6)和引物对B2(SEQ ID No.7和SEQ ID No.8)组成。本发明利用序列同源比对筛选香菇0912的一对原生质体单核体SP3和SP30上A交配型位点HD₁基因和B交配型位点RCB₂基因上的变异位点，设计特异引物，建立了基于HD₁和RCB₂基因变异位点的香菇交配型鉴定方法，可用于0912品种单核体交配型鉴定、以及其他香菇品种与0912品种亲缘关系的鉴定。

技术领域

本发明涉及食用菌领域，具体涉及香菇0912品种交配型鉴定引物及其应用。

背景技术

杂交育种是指不同基因型的配子体交配产生杂种的过程。在食用菌育种领域，杂交育种是最为主要的育种方式，其生物学基础是受到交配型系统的有性生殖过程。交配型基因是控制食用菌杂交、有性繁殖和子实体形成的重要遗传信息。单核体能够进行营养生长，但通常是不育的。携带相同交配型基因的单核体互相交配均不能形成稳定的异核体。对于香菇等四极性异宗配合担子菌，有性生殖依赖于两个不存在连锁遗传关系的交配位点，即：编码同源域转录因子(homeodomain transcription factors，HD)的A交配型位点，控制锁状联合形成、异核配对等生物学过程；编码脂肽信息素(pheromone，PHB)和信息素受体(pheromone receptor，RCB)的B交配型位点，控制核的迁移、细胞隔膜融解等功能。A和B位点不同等位基因在两个单倍体之间均不同时，形成异源复合体，激活锁状联合，使得可亲和的单核体菌丝形成可产生子实体的异核体菌丝。其中，A交配型位点包含的一对交配型基因HD₁、HD₂以及mip(mitochondrial intermediate peptidase)基因和β-fg(beta-flanking)基因。B交配型位点分为多个亚位点，包括Bα亚位点(RCB₁)、Bβ交配型亚位点(RCB₂)、RCB₃和RCB₄亚位点、RCB₅亚位点和游离的RCB基因。

香菇是我国年产量和年消费量最大的食用菌品种。近年来，香菇产业发展迅速、栽培区域不断扩大，对于香菇高产优质品种、区域特适性品种等需求也随之提升。因此，香菇新品种的选育成为保障我国香菇产业高质量发展的必经之路。合理、恰当的香菇同核体鉴定，有助于缩短香菇育种周期，提高定向育种效率。香菇属于典型的异宗配合四极性交配型食用菌，交配型基因序列具丰富多态性。前期本团队已完成香菇0912品种(辽抚4号)的一对可杂交配对的香菇原生质体单核化菌株SP3和SP30的基因组精细图谱(Gao Q,etal.2022.Haplotype-resolved genome analyses reveal genetically distinct nucleiwithin a commercial cultivar of Lentinula edodes.Journal of Fungi,8(2):167.Gao Q,et al.2023.Insights into the Global Transcriptome Response ofLentinula edodes Mycelia during Aging.J.Fungi 2023,9(3),379；https://doi.org/10.3390/jof9030379)，研究发现：SP3和SP30菌株的HD₁之间存在17处插入/缺失片段(Insertion Deletion，InDel)，HD₂基因存在28处InDel；SP3菌株的HD基因与W1-26菌株同源性较高，SP30菌株的HD基因则与L808较为同源。因此，香菇交配型基因在基因型鉴定等方面也极具应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供香菇0912品种交配型鉴定引物及其应用。