[发明专利]检测血清总IgE含量的试剂盒及应用

说明书

本发明涉及体外检测技术领域，特别涉及检测血清总IgE含量的试剂盒及应用。本发明提供了单糖在降低血清总IgE含量偏差中的应用、组合物、保存缓冲液、磁微粒混悬液、试剂盒及其制备方法。本发明的试剂盒中，磁微粒混悬液的保存液中添加了甘露糖，并进行含量优化，配制磁微粒混悬液，可以减少不同样本采集管中IgE含量差异。本发明的试剂盒适配于全自动磁微粒化学发光仪，反应用时短，操作便捷，结果准确、灵敏度高，特异性强，自动化程度高。

技术领域

本发明涉及体外检测技术领域，特别涉及检测血清总IgE含量的试剂盒及应用。

背景技术

过敏反应主要由IgE抗体介导，机体受到变应原刺激时产生IgE抗体，IgE通过其Fc段与肥大细胞或嗜碱性粒细胞膜上的Fc受体结合，使机体处于致敏状态。已致敏的机体再次接触相同抗原时，变应原可与细胞表面的IgE发生特异性结合，引起细胞活化，释放多种生物活性物质，产生过敏反应。IgE是γ糖蛋白，沉降系数为8S，分子量190kDa，耐热性较差，在56℃4h即失去结合能力。正常人血清中含量甚微，约50～300ng/mL，但波动很大，在过敏性性疾病的患者血清中，IgE可上升十倍；在某些寄生虫病、真菌感染和金黄色葡萄球菌感染后其浓度可增加到1000倍于正常值。IgE有两种受体：高亲和力Fc受体(FcεRI)和低亲和力Fc受体(FcεRII)，IgE是亲细胞抗体，其Fc段可与嗜碱粒细胞和肥大细胞表面的高亲和力受体FcεRI结合，当二价以上抗原与细胞上IgE结合，使IgE分子桥联，在Ca²⁺存在下，即可触发细胞内生物活性物质释放从而引发变态反应。除与肥大细胞和嗜碱性粒细胞的FcεRⅠ结合外，IgE还可与B细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、血小板、NK细胞等表达的FcεRII结合，FcεRII和IgE结合亲和力比FcεRⅠ低100～1000倍。

FcεRII又称CD23，是一种II型跨膜蛋白(N端在细胞内)，胞膜外区C端含有1个C型凝集素结构域，并形成三聚体，FcεRII和FcεRI无任何同源性。CD23可通过蛋白酶水解形成37KD可溶性CD23，进一步水解为33KD，29KD，25KD和16KD片段，所有这些片段均保留C端的外源凝集素“头”样结构域，并具有与IgE结合的能力。机体通过CD23、可溶性CD23、IgE、IgE-过敏原复合物和细胞补体受体CD21的复杂相互作用来调节IgE合成。C型凝集素含有一个或多个碳水化合物识别结构域(carbohydrate recognition domain，CRD)，在所有的C型凝集素结构域中，目前总共发现了4个Ca²⁺的结合域，不同的C型凝集素结构域中Ca²⁺结合域组合不同，C型凝集素与IgE结合时不占据该Ca²⁺位点。CRD能够选择性地结合多种配体，糖类是最主要的配体，依赖Ca²⁺结合单糖可能影响CRD蛋白的亲和性及特异性，进而增强与IgE结合的能力，作用机制尚不十分清楚。

目前临床上检测总IgE浓度的方法主要有免疫比浊分析、放射免疫分析、酶联免疫分析和发光免疫分析等。免疫比浊分析易受血脂干扰，造成检测结果的不准确。同时，若待检样本含有鼠抗人抗体(HAMA)，可直接桥联单抗致敏微球产生特异性结合，也会干扰结果。放射免疫分析法因使用放射性核素(¹25I)作为标记物，一方面有辐射危险，还给环境带来污染，同时因放射性标记物半衰期短，试剂盒货架期短，不便于保存。酶免法大多需要手工或半自动，操作复杂极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，还存在耗时，线性范围有限和灵敏度低的缺点。化学发光免疫分析因其快速、准确、可定量、操作便捷等优势，越来越多的应用于临床。其以灵敏度高、特异性强、试剂价格低廉、试剂稳定、检测范围宽、操作简单、自动化程度高等优点被广大研究人员所认可，并正逐渐替代传统的生物检测技术。但IgE含量在不同样本采集管中的差异很大，因此提供能够降低不同样本采集管中IgE含量差异的试剂盒具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供的检测血清总IgE含量的试剂盒及应用，可以降低不同样本采集管中IgE含量的差异。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：