[发明专利]一种TK缺失的牛结节性皮肤病病毒及其应用

说明书

本发明涉及病毒疫苗及疫苗制备领域，具体公开了一种通过药物5‑溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)构建和筛选的牛结节性皮肤病病毒毒株突变株LSDVΔTK，一种基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK，保藏日期：2023.3.10，保藏编号：CCTCCNO:V202314，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心；所述基因缺失是TK基因(thymidinekinase)的缺失；所述牛结节性皮肤病病毒毒株LSDV优选Neethling疫苗毒株。本发明得到LSDVΔTK突变株，获得了注射疫苗，在牛体上可产生良好的中和抗体反应，安全性高且没有副反应，为牛养殖节约了预防和治疗牛结节性皮肤病的成本，提高了经济效益。

技术领域

本发明涉及病毒疫苗及疫苗制备领域，具体涉及牛结节性皮肤病病毒疫苗。

背景技术

牛结节性皮肤病(Lumpy Skin Disease，LSD)是一种由牛结节性皮肤病病毒(Lumpy Skin Disease Virus，LSDV)引起牛的一种的高度传染性疫病。临床表现症状为，发热到40～41.5℃，并持续1～3d，体重减轻，产奶量减少，严重的会停止产奶；还会出现流涎、流泪，伴有流脓性或粘脓性鼻涕；全身淋巴结体积增大，形成单个或多个圆形皮肤结节，多出现在头部、颈部、背部、乳房、会阴、生殖器、四肢、尾巴等毛发稀疏区域。皮肤结节溃烂会招引蝇蛆而引起细菌感染，伤口数月无法愈合，最后留下可深入到肌肉组织的永久性痘疤，严重降低皮革制品的质量。虽然LSD发病率差异很大(5％～90％)，死亡率较低(10％以下)，但在个别疫情区域中可达到85％，偶发性或者巨大差异的死亡率可能与牛品种、毒株毒力、动物健康状态以及传播媒介类型等密切相关。LSD给疫情国家的养牛业造成重大经济损失，该病被世界动物卫生组织列为必须报告的疫病之一。

牛结节性皮肤病病毒属于痘病毒科(Poxviridae)，脊椎动物痘病毒亚科(Chordopoxvirinae)，羊痘病毒属(Capripoxvirus)。该病毒属于双链DNA病毒，基因组全长约150kbp，编码约156个假定基因，LSDV粒子呈砖型，长294±20nm，宽262nm±22nm。投射电子显微镜下，羊痘病毒基因组呈现三折叠螺旋状或管状，且基因组组成了双凹核心的结构，该核心和两个侧体被衣壳包围。与其它痘病毒基因组一样，两末端是发卡结构，这样的发卡结构与复制密切相关，紧邻发卡结构的两末端是反向重复序列(ITR)。TK已经在DNA病毒中被证明是复制非必须的毒力基因，当其被缺失后病毒毒力会降低(TenserRB,1991；MartínHernándezAM etal，1995)，但是抗原性不受影响(刘正飞等，2002)。LSDV TK(thymidinekinase)基因全长534bp，编码178个基酸，对LSDV毒力同样有着重要影响(Wallace DB,Viljoen GJ，2022)。

自2019年LSD传入我国以来，该病已经迅速在我国各省市传播开来，给养殖业带来巨大经济损失。目前没有特效药物可以治疗牛结节性皮肤病。一般用弱毒活疫苗(LAV)用于预防LSD；第一类为基于LSDV毒株的弱毒同源疫苗，包括Neethling株疫苗和KGSP株疫苗；第二类为非LSDV毒株弱毒异源疫苗，如山羊痘疫苗和和绵羊痘疫苗。南非地区主要以弱毒同源疫苗(Neethling/vaccine/LW1959)来控制该病，且已有多种衍生疫苗，如Lumpyvax、Herbivac LS和OBP等疫苗。尽管弱毒同源疫苗通过连续传代致弱，但在使用Neethling疫苗时，牛会产生副作用。常见的副作用表现为接种部位的局部反应、短暂的发烧和产奶量下降，有些动物可能会表现出温和的全身性反应。因此，尽快研发一款或者几款安全、有效的LSD治疗药物或疫苗对养牛产业意义重大。

发明内容

第一方面，本发明提供一种基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK，保藏日期：2023.3.10，保藏编号：CCTCC NO:V202314，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心。

进一步的，所述基因缺失是TK基因(thymidine kinase)的缺失。