[发明专利]Rab11蛋白的特异性抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种用Rab11蛋白免疫骆驼科动物所得的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段。本发明依靠骆驼科动物的免疫系统筛选、鉴定并制备特异性识别、结合Rab11蛋白的抗体，所得到的抗体特异性强，可用于目标抗原检测，有潜在临床诊断和治疗价值；且本发明提供的抗体结构简单，容易进行基因工程改造，也容易实现人源化，稳定性高，量产成本低，有利于实现规模化生产。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及Rab11蛋白的特异性抗体及其制备方法与应用。

背景技术

抗体是一种主要由浆细胞分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等外来物的蛋白质，该外来物被称为抗原。抗体和抗原的结合完全依靠非共价键的相互作用，这种特异性的结合机制使得抗体可以捕获外来微生物以及受感染的细胞，进一步诱导其他免疫机制对其进行攻击，或直接中和其目标。抗体及抗体相关产品已经被广泛应用于生命科学与医学等研究领域，基于抗原-抗体特异性结合而衍生的诸多实验技术奠定了科学研究与临床治疗的重要基础，例如免疫诊断、免疫印迹、酶联免疫吸附、流式细胞分析等等。

Rab11(Ras-related protein 11)是Ras超家族的成员，是细胞内膜运输的关键调节剂，参与从运输囊泡的形成到它们与膜的融合。Rab家族蛋白质成员在非活性GDP结合形式和活性GTP结合形式之间循环，能够将不同组的下游效应子募集到膜上，直接负责囊泡的形成、运动、束缚和融合。Rab11主要参与调节细胞内吞循环，同时在胞质分裂过程中作为膜传递的主要调节剂。Rab11还与Rab8等多种蛋白质一起参与上皮细胞极化、促进细胞的转胞吞作用，同时参与多种重要细胞膜蛋白从高尔基体至细胞膜的转运和分选。

在研究Rab11过程中，抗体是一个非常重要的研究工具，对于患者诊断、病毒分析与研究等都具有重大的价值和意义。然而，传统的鼠、兔等动物仅能识别抗原表面平展的多肽。因此，需要开发一种能够识别抗原表面复杂的空间结构，产生高度特异性、高亲和力的纳米抗体。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题之一，本发明提供了一种Rab11蛋白的特异性抗体及其制备方法与应用。

第一方面，本发明提供用Rab11蛋白免疫骆驼科动物所得的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段。

在一些实施方案中，所述骆驼科动物选自单峰驼、双峰驼、美洲驼、骆马、羊驼和小羊驼，优选为羊驼。

在一些实施方案中，所述抗体为纳米抗体，所述抗体活性片段为纳米抗体活性片段。

在一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体或者多克隆抗体。

在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段与所述Rab11蛋白结合的kd值在500nM以下，优选在300nM以下，更优选在200nM以下，更优选在100nM以下，更优选在50nM以下。

在一些实施方案中，所述Rab11蛋白具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。进一步优选地，所述Rab11蛋白由包括如下步骤的方法制备而成：将编码所述Rab11蛋白的核苷酸序列构建至载体质粒；将所述载体质粒转染至真核细胞系中表达，纯化。

在一些实施方案中，所述Rab11蛋白可通过商业渠道获得。

第二方面，本发明提供一种构建抗体文库的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将Rab11蛋白作为抗原免疫骆驼科动物，采集被免疫动物的静脉外周血，分离得到淋巴细胞；

(2)提取所述淋巴细胞的总mRNA，反转录为cDNA并进行扩增；

(3)将所述扩增得到的DNA插入病毒表达载体，转化入细菌，收集菌落，得抗体文库。

在一些实施方案中，所述骆驼科动物选自单峰驼、双峰驼、美洲驼、骆马、羊驼和小羊驼，优选为羊驼。