[发明专利]一种解脂耶氏酵母工程菌及其应用在审
| 申请号： | 202310361322.8 | 申请日： | 2023-04-06 |
| 公开（公告）号： | CN116426398A | 公开（公告）日： | 2023-07-14 |
| 发明（设计）人： | 吴伟斌;林博 | 申请（专利权）人： | 福建平潭宝世贵生物科技合伙企业（有限合伙） |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/53;C12N15/54;C12P23/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 福州科扬专利事务所(普通合伙) 35001 | 代理人： | 李晓芬 |
| 地址： | 350499 福建省福州市平潭综合实验区金井*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 解脂耶氏 酵母 工程 及其 应用 | ||
1.一种解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378，其特征在于：保藏编号为CCTCCNO：M 2023294的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378；所述解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378基因组整合了CrtYB-CrtI-DAG1-VHb基因簇和BsCrtW-PaCrtZ突变基因簇。
2.如权利要求1所述的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378，其特征在于：所述解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378基因组过表达CrtYB基因和CrtI基因，CrtYB基因和CrtI基因来源于红法夫酵母Xanthophyllomyces dendrorhous，CrtYB基因如SEQ ID NO.1所示，CrtI基因如SEQ IDNO.2所示。
3.如权利要求1所述的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378，其特征在于：所述解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378基因组过表达DAG1基因，DAG1基因来源于解脂耶氏酵母Yarrowialipolytica，如SEQ ID NO.3所示。
4.如权利要求1所述的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378，其特征在于：所述解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378基因组过表达VHb基因，VHb基因来源于透明颤菌Vitreoscilla，如SEQ IDNO.4所示。
5.如权利要求1所述的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378，其特征在于：所述解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378基因组过表达BsCrtW突变基因，BsCrtW突变基因来源于海洋短波单孢菌Brevundimonas sp.，如SEQ ID NO.5所示，其第12位的A突变成C，241位的G突变成A，485位的G突变成T。
6.如权利要求2所述的生物合成虾青素的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378，其特征在于：所述解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378基因组过表达PaCrtZ突变基因，PaCrtZ突变基因菠萝泛菌Pantoea ananatis，如SEQ ID NO.6所示，其第147位的A突变成C，392位的G突变成A。
7.如权利要求1所述的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378，其特征在于：所述解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378基因组上敲除甘油-3-磷酸脱氢酶GUT2基因位点。
8.一种如权利要求1所述的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378的构建方法，其特征在于：将所述CrtYB-CrtI-DAG1-VHb基因簇通过多拷贝质粒pINA1312导入解脂耶氏酵母基盘菌株，得到解脂耶氏酵母工程菌ZM072，再将经DNA改组后的BsCrtW-PaCrtZ突变基因簇通过单拷贝质粒pINA1269导入所述已整合CrtYB-CrtI-DAG1-VHb基因簇且敲除GUT2基因的解脂耶氏酵母菌株，经高通量筛选得到高效合成虾青素的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378。
9.如权利要求1所述的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378以葡萄糖为底物高效合成虾青素。
10.一种解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378以葡萄糖为底物合成虾青素的方法，其特征在于：培养如权利要求1所述的解脂耶氏酵母工程菌ZMW1378，获得种子液；再将种子液接种到发酵培养基中，进行葡萄糖反馈补料发酵，发酵过程的pH控制在5.6-6.0，发酵过程的温度为28-30℃，发酵时间优选96-128h；葡萄糖反馈补料控制其浓度在0.2-2g/L，通过葡萄糖反馈补料发酵获得虾青素。
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