[发明专利]用于选择性扩增MYD88基因L265P突变型的组合物、试剂和应用

权利要求书

1.用于选择性扩增MYD88基因L265P突变型的组合物，其特征在于，所述组合物包括引物对1和阻断探针，所述阻断探针靶向MYD88基因的核酸片段覆盖编码第265位氨基酸的CDS片段，所述引物对1包括靶向阻断探针上游的正向引物和靶向阻断探针下游的反向引物；

所述阻断探针为肽核酸修饰探针。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述阻断探针靶向MYD88基因的片段范围包括编码第265位氨基酸的密码子的上游至少3个核苷酸和/或下游至少3个核苷酸，所述阻断探针的核苷酸长度为13～20bps；

优选地，所述阻断探针靶向MYD88基因的片段范围包括编码第265位氨基酸的密码子的上游至少7个核苷酸和/或下游至少6个核苷酸，所述阻断探针的核苷酸长度为14bps；

优选地，所述阻断探针的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述引物对1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示，所述引物对1的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No:3所示。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括用于定性或定量检出MYD88基因L265P突变型扩增结果的检测探针1；

优选地，所述检测探针1连有荧光基团，或者，所述检测探针1连有荧光基团和淬灭基团；

优选地，所述荧光基团选自FAM、VIC、ROX或CY5；

优选地，所述淬灭基团选自MGB、BHQ1、BHQ2或BHQ3；

优选地，所述检测探针1的核苷酸序列如SEQ ID No:4所示。

5.权利要求1～4任一项所述的组合物在MYD88基因L265P突变型选择性扩增或在MYD88基因L265P突变型检测中的应用。

6.用于选择性扩增MYD88基因L265P突变型的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1～4任一项所述的组合物，和用于检测内参基因的引物对2和检测探针2；

所述内参基因包括RNase P基因。

7.根据权利要求6所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述引物对2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No:5所示，所述引物对2的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No:6所示，所述检测探针2的核苷酸序列如SEQ IDNo:7所示；

优选地，所述检测探针2连有荧光基团，或者，所述检测探针2连有荧光基团和淬灭基团，且所述检测探针2的荧光基团和检测探针1的荧光基团不同；

优选地，所述荧光基团选自VIC、FAM、ROX或CY5；

优选地，所述淬灭基团选自MGB、BHQ1、BHQ2或BHQ3。

8.选择性扩增MYD88基因L265P突变型的方法，其特征在于，将待测样本和权利要求6或7所述的试剂加入PCR扩增体系中，经扩增得到富含MYD88基因L265P突变型的扩增产物。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR包括数字PCR或荧光定量PCR。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR的扩增程序为：95℃下预变性10min，循环1次；95℃下变性30s，72℃下PNA结合30s，58℃下退火延伸1min，循环45次。