[发明专利]一种偶联物的制备方法在审
| 申请号： | 202310365160.5 | 申请日： | 2019-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN116355873A | 公开（公告）日： | 2023-06-30 |
| 发明（设计）人： | 龚俊;祁金祥;张启飞;肖兰萍;王贵利;刘希 | 申请（专利权）人： | 北京九强生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;G01N33/535;G01N33/58 |
| 代理公司： | 北京戈程知识产权代理有限公司 11314 | 代理人： | 程伟;程云 |
| 地址： | 100083 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 偶联物 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种偶联物的制备方法，其包括步骤：
提供6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体；
提供苯妥英衍生物；
所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体与所述苯妥英衍生物偶联；
所述苯妥英衍生物是下式I所示：
相较于野生型6-磷酸葡萄糖脱氢酶，所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体包含突变D306C；所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体是SEQ ID No.2所示。
2.根据权利要1所述的偶联物的制备方法，其包括步骤：
1)提供苯妥英衍生物，优选在非质子性溶剂中提供苯妥英衍生物；
2)提供6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体，优选在缓冲液中提供所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体；
3)在18℃至28℃，将所述苯妥英衍生物和所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体接触1小时至4小时，优选2小时至3小时，使得所述苯妥英衍生物和所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体发生偶联，得到所述偶联物；
4)任选，对所述偶联物进行纯化，优选脱盐；
步骤1)和2)能够互换或并行；
所述缓冲液选自以下一种或组合：PBS、Tris、TAPS、TAPSO，所述缓冲液的pH为6.0至8.0；
所述非质子性溶剂选自以下一种或组合：乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜；
在步骤3)之前，所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体在第306位有游离巯基。
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