[发明专利]用于鉴别三华李和早李的引物组及其应用

说明书

本发明公开了用于鉴别三华李和早李的引物组及其应用。本发明的15对InDel分子标记引物序列如SEQ ID NO.1‑30所示，使用本发明的分子标记引物能够快速、准确的鉴定区分华南李中的三华李和早李类型，能够鉴定三华李和早李类型间的天然杂种，能够有效鉴别三华李类和早李类型间经人工杂交所得后代是否为真杂种。本发明的引物组在保护和利用华南李种质资源及推进华南李杂交育种工作等方面都有着重要应用价值。

技术领域

本发明属于植物分子标记开发、分子标记辅助育种及种质资源鉴定技术领域，具体涉及用于鉴别三华李和早李的引物组及其应用。

背景技术

我国是世界上最大的李生产国，华南是我国李的主要栽培区，经过长期的自然选择和人工选择形成了一个需冷量很低的华南李品种群，其成熟期比长江流域平均早1个月以上，销路广、价格高、种植效益显著。广东省是华南李的主体，不仅是现有主栽华南李品种的原产地，而且产业规模约占华南地区的70％。目前广东省规模栽培的华南李主要包括三华李(约占全省80％)和早李(约占全省15％)等类群。

华南李类群的划分主要是依据成熟时果皮果肉的颜色，三华李成熟时为红皮红肉，早李为红皮黄肉。三华李和早李在花与叶片形态等方面存在着细微的区别，但由于栽培管理条件、树龄树势、类群内细微的自然变异、个人主观经验差异等诸多因素，使得在非果实成熟期，仅凭外部形态对华南李两种主要类群种质进行区分辨识，存在一定的难度与不准确性。

三华李和早李类群在广东李主产区长期混杂种植，在不断地自然选择与人工驯化过程中存在着一定程度的基因交流，可能存在着类群之间的天然杂种。此外，三华李和早李作为在华南李产区栽培历史最长、适应性最强的主栽品种类型，分别在果肉颜色与需冷量等性状方面有各自的优势与特色，通过人工杂交的方式创制筛选杂交新品种，以综合三华李与早李的优良性状，是培育华南李优良新品种的有效途径。目前仅凭成熟期果肉颜色等有限的形态标记，难以对华南李主要类群特别是对类群间的杂交后代进行高效可靠的鉴定与区分。

分子标记是在基因水平上的标记，直接在DNA分子水平上检测遗传变异，不受组织器官种类和环境等多因素的影响。插入缺失长度多态性(Insertion-Deletion LengthPolymorphism,InDel)标记是在等位基因位点上一定数量的核苷酸插入或缺失而产生的长度多态性变异，属于第三代分子标记，主要基于全基因组测序而开发，具有标记特异性高、稳定性好、检测方法简单、经济等优点。

目前关于华南李分子标记的报道较为有限，且主要为SNP类型的标记，但存在着成本高、验证困难等问题。目前尚未有华南李中InDel标记的相关报道，且未有专门针对华南李中三华李和早李两大主要类群开发设计的分子标记。因此，开发InDel等简单高效的分子标记，区分三华李与早李等华南李主要品种类群，在分子层面对类群间的杂交后代进行准确鉴定，对进一步理清华南李种质资源类型及推动华南李的杂交育种的开展，都有着迫切的实际需求与重要的意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供用于鉴别三华李和早李的引物组及其应用。

本发明的第一个目的是提供用于鉴别三华李和早李的引物组，为选自如下引物对中的至少3对引物的组合；

标记P1-6的引物对：上游引物：GGACCCCATGCTGAAGAAAA(核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示)，下游引物：CAAATCTAAGGGCAAGTCCAAT(核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)；

标记P1-8的引物对：上游引物：GGTTTTCTCGAAGTCGGTGAT(核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示)，下游引物：GGCTTGTGATATATTAGAACCCATG(核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示)；