[发明专利]合成天麻素的重组菌株及其构建方法和发酵合成天麻素的方法在审
| 申请号： | 202310371074.5 | 申请日： | 2023-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN116478843A | 公开（公告）日： | 2023-07-25 |
| 发明（设计）人： | 顾洋;朱姜;林铭鑫;桑艾莉;刘桐糠;宋彦瑾;李昌凡;黄和 | 申请（专利权）人： | 南京师范大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/54;C12N15/61;C12N15/113;C12P19/44;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 李娟 |
| 地址： | 210046 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 合成 天麻 重组 菌株 及其 构建 方法 发酵 | ||
1.一种合成天麻素的重组菌株，其特征在于，该重组菌株由出发菌株经遗传改造获得，相比于所述出发菌株，所述重组菌株整合表达有下述(a)-(c)所述的基因中的至少一者：
(a)由启动子PUGA2启动的磷酸葡萄糖变位酶PGM1基因；
(b)由启动子PFBA1启动的葡萄糖焦磷酸化酶UGP1基因；
(c)由启动子PTER启动的腺苷酸激酶AK9基因。
2.根据权利要求1所述的重组菌株，其特征在于，所述重组菌株整合表达有(a)、(b)和(c)所述的基因；
优选地，所述启动子PUGA2的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述启动子PFBA1的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述启动子PTER的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
3.根据权利要求1或2所述的重组菌株，其特征在于，所述磷酸葡萄糖变位酶PGM1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述葡萄糖焦磷酸化酶UGP1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述腺苷酸激酶AK9基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；
优选地，所述磷酸葡萄糖变位酶PGM1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述葡萄糖焦磷酸化酶UGP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述腺苷酸激酶AK9基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示。
4.根据权利要求1或2所述的重组菌株，其特征在于，所述出发菌株为解脂耶氏酵母；
优选地，所述出发菌株为敲除基因Ku70，并在Ku70位点整合表达糖基转移酶SlyUGT基因的解脂耶氏酵母，其中，所述基因Ku70的核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示，所述糖基转移酶SlyUGT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：11所示。
5.一种构建合成天麻素的重组菌株的方法，其特征在于，该方法包括：对出发菌株进行遗传改造以使得所述出发菌株整合表达有下述(a)-(c)所述的基因中的至少一者：
(a)由启动子PUGA2启动的磷酸葡萄糖变位酶PGM1基因；
(b)由启动子PFBA1启动的葡萄糖焦磷酸化酶UGP1基因；
(c)由启动子PTER启动的腺苷酸激酶AK9基因。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述重组菌株整合表达有(a)、(b)和(c)所述的基因；
优选地，所述启动子PUGA2的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述启动子PFBA1的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述启动子PTER的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；
所述磷酸葡萄糖变位酶PGM1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述葡萄糖焦磷酸化酶UGP1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述腺苷酸激酶AK9基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；
优选地，所述磷酸葡萄糖变位酶PGM1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述葡萄糖焦磷酸化酶UGP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述腺苷酸激酶AK9基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示。
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