[发明专利]一种紫点海葵多肽毒素HC-G02及其合成方法、应用

权利要求书

1.一种紫点海葵多肽毒素HC-G02，其特征在于，其氨基酸序列为APCSGCYYQVGNECVYDKLKC-NH₂。

2.根据权利要求1所述的紫点海葵多肽毒素HC-G02，其特征在于，所述紫点海葵多肽毒素HC-G02具有四个半胱氨酸形成两个二硫键，二硫键的连接方式为C1-C3和C2-C4。

3.权利要求1所述紫点海葵多肽毒素HC-G02的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)称取树脂，先用二氯甲烷浸泡，然后依次用二甲基甲酰胺和二氯甲烷洗涤，加入Fmoc-Ala-OH、二氯甲烷和N,N-二异丙基乙胺进行反应，再加入甲醇和二氯甲烷反应，用二甲基甲酰胺洗涤，再加入含吡啶的二甲基甲酰胺溶液洗涤，得到第一个树脂；

(2)在第一个树脂中加入第二个氨基酸Fmoc-Pro-OH和缩合剂，再加入二甲基甲酰胺和N,N-二异丙基碳二亚胺反应，再加入含哌啶的二甲基甲酰胺溶液洗涤，得到第二个树脂；

(3)根据权利要求1所述的氨基酸序列，重复步骤(2)直到肽链结束，得到线性肽树脂；

(4)向线性肽树脂中加入甲醇进行冲洗并抽干，加入切割液切割，过滤后，加入冰乙醚，离心去除上层液冰乙醚，得到沉淀多肽粗品；

(5)纯化多肽粗品，得纯品线性肽HC-G02；

(6)将步骤(5)的线性肽溶于甲醇水溶液中，再用乙酸稀释，滴加甲醇碘溶液，保持搅拌，形成第一个二硫键；

(7)再加入等体积盐酸-甲醇溶液，然后加入甲醇碘溶液，保持搅拌，形成第二个二硫键；

(8)纯化后得到多肽纯品。

4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，步骤(1)为：称取树脂，先用二氯甲烷浸泡，然后依次用二甲基甲酰胺和二氯甲烷洗涤，加入0.6～1.0mmol Fmoc-Ala-OH、10～15mL二氯甲烷和1～3mL N,N-二异丙基乙胺进行反应80～100min，再加3～5mL甲醇和8～12mL二氯甲烷封闭反应25～35min，用二甲基甲酰胺洗涤，再加入含吡啶的二甲基甲酰胺溶液洗涤15～25min，得到第一个树脂；其中，所述含哌啶的二甲基甲酰胺溶液是哌啶质量分数为20％的DMF溶液。

5.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，步骤(2)为：在第一个树脂中加入1.5～2.0mmol第二个氨基酸Fmoc-Pro-OH和1.5～2.0mmol缩合剂，再加入5～15mL二甲基甲酰胺和1～3mL N,N-二异丙基碳二亚胺反应0.5～1.5h，再加入含哌啶的二甲基甲酰胺溶液洗涤15～25min，得到第二个树脂；其中，所述含哌啶的二甲基甲酰胺溶液是哌啶质量分数为20％的DMF溶液。

6.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述切割液含有：95wt％三氟乙酸、1wt％H₂O、2wt％1,2-乙二硫醇和2wt％三异丙基硅烷。

7.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，步骤(6)为：将步骤(5)的线性肽溶于50v/v％甲醇水溶液中，再用乙酸稀释使肽液最终浓度为每毫升混合溶液中含有肽1mg，滴加10mg/mL甲醇碘溶液，保持搅拌，形成第一个二硫键。

8.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，步骤(7)为：再加入与步骤6总体积相等的盐酸-甲醇溶液，然后加入10mg/mL甲醇碘溶液，保持搅拌，形成第二个二硫键。

9.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，步骤(8)和步骤(5)中，利用高效液相色谱法进行纯化，纯化条件为：流动相A为H₂O，流动相B为乙腈，流速5mL/min，45min线性梯度洗脱，流动相B体积占比由5％升至50％。

10.权利要求1所述的紫点海葵多肽毒素HC-G02在制备镇痛剂方面的应用。