[发明专利]一类提高重组抗体分泌表达量的蛇毒素信号肽及其产品和应用

说明书

本发明公开了一类提高重组抗体分泌表达量的蛇毒素信号肽及其产品和应用，属于基因工程抗体技术领域，本发明涉及的信号肽包括蛇毒素信号肽和将其突变获得的新信号肽，通过PCR将重组抗体自身携带的原始信号肽，替换为本发明所述信号肽，与重组抗体原始信号肽相比，本发明所述信号肽引导重组抗体更高效分泌；将两种信号肽与抗体自身的信号肽以及其他常用于抗体分泌表达的信号肽相比，含本发明的信号肽的抗体表达水平明显提高，降低了目标抗体生产成本，对于抗体需求量很大的生物医学领域具有很大的应用前景。

技术领域

本发明属于基因工程抗体技术领域，具体涉及一类提高重组抗体分泌表达量的蛇毒素信号肽及其产品和应用。

背景技术

重组抗体，也称为基因工程抗体，是通过DNA重组技术将抗体相应的基因序列根据需要进行改造和重组，并构建在质粒上，再通过蛋白外源表达技术将构建好的质粒转染/转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。重组抗体实现了抗体人源化，很好的解决了动物源抗体引起的人体排斥反应，目前已经广泛应用于生物医学的研究，以及疾病的诊断和治疗，且需求量大。重组抗体在多种体系中都能成功表达，其中哺乳动物细胞是目前比较成熟且应用最多的表达体系。哺乳动物细胞表达体系能用于各种重组抗体的表达，因此目前治疗性单抗的生产基本都采用哺乳动物细胞表达体系，但是其也存在表达产量相对较低，生产成本较高等缺点。因此，优化抗体的表达，以达到增加抗体的表达量并减少生产成本的目的，对满足将来日益增长的抗体需求量起着至关重要的作用。

在蛋白质(如抗体)生产中，表达水平受很多因素影响，是否能有效的分泌是关键因素，大多数分泌型蛋白通过信号肽启动经典的内质网高尔基体途径进行分泌表达。信号肽是分泌型蛋白N端一段特有的氨基酸序列，由30个左右的氨基酸组成，对蛋白的跨膜分泌效率有着重大的影响，它具有引导前体肽进入粗面内质网内且通过分泌途径分泌出胞外的作用，可以将蛋白定位于细胞膜或跨膜到达细胞外。信号肽序列一般不具有明显的氨基酸序列保守性，一般由带有正电荷的N结构域、富含疏水氨基酸的H结构域以及带有负电荷的C结构域组成。可见，信号肽对重组抗体的分泌具有重要作用，在抗体的实际生产中，常遇到所构建载体的抗体蛋白不分泌或分泌量低等问题，当重组抗体的基因序列带有一段自身的信号肽序列用于分泌时，如果重新构建的表达载体不能或低效率的利用抗体本身的信号肽序列获得高表达分泌目标抗体时，可以重新筛选高表达蛋白质的信号肽替代原信号肽或对原有信号肽进行优化，通过提高重组抗体的分泌效率，以提高目标抗体的表达量。当重组抗体不带有自身信号肽时，可以通过添加一段合适的信号肽序列，用来引导抗体的分泌以提高目标抗体的表达量。

目前，已有报道表明更换信号肽后可以显著提高蛋白分泌表达量，所以增加或替换合适的信号肽到目标抗体的基因是一种有效提高目的蛋白分泌产量的方法，它不仅可以提高分泌效率，简化下游的纯化过程，而且对抗体的稳定性和活性都具有积极的作用。因此信号肽的筛选和优化对于提高抗体的分泌表达量，降低生产成本具有重要意义。

当前，还未有关于蛇毒素信号肽能够提高重组抗体或重组蛋白分泌表达量的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一类提高重组抗体分泌表达量的蛇毒素信号肽及其产品和应用。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了蛇毒素信号肽在提高重组抗体分泌表达量中的应用，所述蛇毒素信号肽包括蛇毒素信号肽及其突变信号肽，该蛇毒素信号肽及其突变信号肽能够引导重组抗体分泌表达。

优选地，所述蛇毒素信号肽为银环蛇毒素信号肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码其的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，还包括其他能够编码其的核苷酸序列。

进一步优选地，基于银环蛇毒素信号肽的突变信号肽是将银环蛇毒素信号肽的第3个氨基酸和第13个氨基酸突变后获得，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。