[发明专利]一种甘薯脱毒组培苗二氧化碳无糖驯化方法

说明书

本发明涉及一种甘薯脱毒组培苗二氧化碳无糖驯化方法，将40～50天满瓶苗剪去沾有含糖培养基的根部接种入二氧化碳无糖培养盒中，培养盒中通入二氧化碳，先封闭培养5天，第6天开始半开盖培养，第8天或第9天或第10天开始全开盖培养，培养至第14～16天，剪去多余须根，即可移栽至温室小拱棚中。二氧化碳无糖培养盒中含有黄金蛭石和珍珠岩以及培养液，培养液中含有硝酸钙1.15g/L，磷酸二氢钾0.2g/L，硼酸2.86mg/L，铁盐40mg/L，亚硒酸盐20mg/L，其余为双蒸水。本发明采用二氧化碳为碳源，培养基质及培养液中不含有机质，脱毒组培苗没有细菌及霉菌污染的风险，同时本发明有效地缩短了甘薯脱毒组培苗的无糖培养时间，提高了供苗效率和活苗率。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体是一种甘薯脱毒组培苗二氧化碳无糖驯化方法。

背景技术

甘薯具有抗旱性强、耐瘠薄、适应性广等特点，在我国分布十分广泛，几乎所有省市均有甘薯种植。甘薯种植过程中，病毒病害会对甘薯产量及品质造成严重影响，且目前尚无特别有效的化学防治药剂，而种植脱毒的健康种苗是防治病毒病害、提高甘薯产量最有效的方法。

甘薯脱毒组培苗在组培瓶内进行光合作用时所需的碳源主要来自培养基中的糖，此时对光照要求不高，脱毒组培苗自身的光合能力较差，属于异养生活。传统的甘薯脱毒组培苗往往采用小拱棚直接入土的移栽方法，这使得移栽后的组培苗立马面临从异养转为自养生活的状况，因此移栽后一些生长质量较差的组培苗会无法适应而死苗，活苗率仅有60～70％，这严重影响着后续的供苗数，制约着甘薯产业的发展。

植物无糖培养技术又称作自养微繁殖技术，通常用二氧化碳来代替培养基中的糖作为碳源。目前关于甘薯脱毒组培苗的二氧化碳无糖驯化方法较少，现有涉及甘薯脱毒组培苗无糖培养的技术对组培苗的培养时间较长，通常在25天以上，有的在30天以上。现有方法中对甘薯脱毒组培苗的培养时间较长，效率较低，对供苗数和甘薯产业发展存在较大的影响。

发明内容

本发明的目的在于提供一种甘薯脱毒组培苗二氧化碳无糖驯化方法，能够缩短甘薯脱毒组培苗的无糖培养时间，提高供苗效率和活苗率。

本发明具体是通过以下技术方案来实现的，依据本发明提出的一种甘薯脱毒组培苗二氧化碳无糖驯化方法，包括以下步骤：

(1)在培养瓶中进行甘薯脱毒组培苗培养；

(2)选择40～50天满瓶苗，苗高5～7cm，剪去沾有含糖培养基的根部，按每盒26～30棵苗的量将去根后的甘薯脱毒组培苗接入二氧化碳无糖培养盒中，盖上培养盒盖，连接二氧化碳供给管向二氧化碳无糖培养盒内供给二氧化碳；

其中，二氧化碳无糖培养盒中每盒装有黄金蛭石和珍珠岩，并加入一定量的培养液混匀；所述的培养液中含有硝酸钙1.15g/L，磷酸二氢钾0.2g/L，硼酸2.86mg/L，铁盐40mg/L，亚硒酸盐20mg/L，其余为双蒸水；

(3)将甘薯脱毒组培苗在二氧化碳无糖培养盒中封闭培养5天，培养期间光源选用两根18W的红蓝白光源，二氧化碳无糖培养盒距光源25cm，光照强度80μmol·m^-2·s^-1，每天光照13小时，二氧化碳供给量为900～1100ppM，二氧化碳供给时间与光照时间同步，培养温度为26～28℃，培养盒内湿度80～85％；

(4)培养第6天开始，二氧化碳无糖培养盒半开盖，培养期间选用四根18W的红蓝白光源，培养盒距光源25cm，光照强度160μmol·m^-2·s^-1，每天光照13小时，二氧化碳供给量为1000～1200ppM，二氧化碳供给时间与光照时间同步，培养温度为26～28℃，培养盒内湿度60～70％；期间每2天补充100mL培养液；