[发明专利]一种马来良姜离体再生的方法

说明书

本发明公开了一种马来良姜离体再生的方法，本发明采用马来良姜的根段为外植体，诱导根段分化愈伤组织，再诱导愈伤组织分化不定根和不定芽，整个过程利用植物细胞的全能性，完成离体再生。本发明马来良姜根的愈伤组织的诱导率达97%，从愈伤组织诱导分化不定根不定芽时的分化率可达100%。本发明实现了马来良姜中的离体再生，对于后续马来良姜的育种研究和基因研究较为重要。

技术领域

本发明属于植物再生技术领域，具体涉及一种马来良姜离体再生的方法。

背景技术

植物组织离体培养技术作为细胞工程与基因工程研究的基本方法，具有实验条件人为可控、重复性强等特点，是获得基因改良植株的技术基础。马来良姜（ Alpinia muticaRoxb .）是姜科（ Zingiberaceae）山姜属（ Alpinia）植物，它的根状茎可用于治疗肠胃胀气，果实可用于治疗腹泻，果皮油具有良好的抗氧化活性，可用作天然的抗氧化剂，也具有抗微生物活性，可用于抗菌杀虫，药用价值潜力巨大。由于马来良姜本身含有大量次生代谢产物，对于建立它的离体再生体系显得尤为困难，但马来良姜具有较大的药用价值和研究潜力，因此，建立一个高效稳定的离体再生体系是马来良姜基因遗传转化体系的前提，为后续育种研究、基因研究提供技术平台，具有深远意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种马来良姜离体再生的方法。

本发明的目的是这样实现的，马来良姜离体再生的方法，按以下步骤实现：

1）在超净工作台取马来良姜35-45d苗龄无菌组培苗的根段，将其剪成0.5-1m长度左右的小段，接种至愈伤组织诱导培养基上，于28-30℃温度、60%-70%湿度下暗培养直至分化出愈伤组织，期间每13-15d更换一次培养基直至分化出愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基为：MS基本培养基+ 0.1-0.4mg/L 2,4-D + 0.5-1.5mg/L 6-BA+ 30g/L蔗糖 +3/LSigma Phytagle，pH=5.8-5.85。

2）将分化出的愈伤组织接种至不定根不定芽分化培养基中，于28-30℃温度、60%-70%湿度下每天光照培养16-18h，暗培养6-8h，培养120d-150d直至分化出不定根不定芽点，期间每13-15d更换一次新鲜培养基；所述不定根不定芽分化培养基为：MS基本培养基+0.5-1.5mg/TDZ +0.5-1.5mg/L NAA +1.5-2.5mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 + 3g/L SigmaPhytagle，pH=5.8-5.85；

3）将愈伤组织分化的不定根不定芽点后接种至添加了 1.5-2.5mg/L 6-BA和0.5-1mg/L NAA的MS基本培养基上，在与步骤2）相同的培养条件下培养至长出叶片，即完成整个离体再生过程。

本发明的有益效果为：本发明采用马来良姜的根段为外植体，诱导根段分化愈伤组织，再诱导愈伤组织分化不定根和不定芽，整个过程利用植物细胞的全能性，完成离体再生。本发明马来良姜根的愈伤组织的诱导率达97%，从愈伤组织诱导分化不定根不定芽时的分化率可达100%。本发明实现了马来良姜中的离体再生，对于后续马来良姜的育种研究和基因研究较为重要。

附图说明

图1为马来良姜离体再生的外植体-根；

图2为根分化出的愈伤组织；

图3为愈伤组织分化出的不定根；

图4为在愈伤组织分化不定根的基础上继续分化不定芽点；

图5为分化出的完整植株，从左至右依次为出叶后生长10d、25d、40d的完整植株。

具体实施方式