[发明专利]一种自分泌IL-21的NKL-IL21细胞系及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 202310421034.7 | 申请日： | 2023-04-14 |
| 公开（公告）号： | CN116590343A | 公开（公告）日： | 2023-08-15 |
| 发明（设计）人： | 张建;张海荣;韩秋菊;赵华俊 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/24;C12N5/10;A61K35/17;A61K38/20;A61P35/00 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 王志坤 |
| 地址： | 250012 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分泌 il 21 nkl il21 细胞系 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种自分泌IL-21的NKL-IL21细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、使用内切酶酶切核酸序列如SEQ ID NO.1所示的hIL-21基因片段和慢病毒载体，通过连接酶将酶切后的hIL-21基因和慢病毒载体连接，获得目的质粒；
S2、使用磷酸钙转染法将目的质粒与包装质粒转染至细胞中，培养后收取病毒液并浓缩纯化；
S3、使用浓缩纯化后的病毒液感染NKL细胞，将感染的NKL细胞进行扩增、流式细胞术分选，得到NKL-IL21细胞系。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述hIL-21基因片段的获取方法包括以下步骤：
分离获取人外周血单个核细胞，并提取RNA逆转录为cDNA，cDNA作为PCR模板扩增出hIL-21基因片段。
3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，PCR上游引物的核酸序列如SEQ ID NO.2所示，，PCR下游引物的核酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，所述慢病毒载体包括pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP，所述内切酶包括BamHⅠ和NheⅠ。
5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，所述连接酶包括T4连接酶。
6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S2中，所述包装质粒包括pMDLg/RRE、pRSV-Rev和p-VSV-G中的一种或多种。
7.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S2中，培养时间为36-60小时。
8.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S2中，使用PEG8000进行浓缩纯化。
9.一种自分泌IL-21的NKL-IL21细胞系，其特征在于，通过权利要求1-8任一项所述的构建方法获得。
10.权利要求9所述的NKL-IL21细胞系在制备抗肿瘤产品中的应用。
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