[发明专利]一种基于基准标记物的漂移矫正与筛选方法及成像方法

权利要求书

1.一种基于基准标记物的漂移矫正与筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：固定荧光基准标记物，使每个生物样品的成像视场有一定数量的荧光基准标记物；

S2：对荧光基准标记物和生物样品进行单分子定位成像，并对所述荧光基准标记物定位；

S3：荧光基准标记物筛选：对多颗荧光基准标记物的定位轨迹取平均，作为初始漂移轨迹，基于所述初始漂移轨迹，筛选能够用于漂移矫正的荧光基准标记物作为定位荧光基准标记物；

S4：利用筛选过的定位基准标记物的定位数据重新计算漂移轨迹；

S5：基于重新计算的漂移轨迹，对生物样品的成像序列进行漂移矫正，

步骤S2中，所述荧光基准标记物定位的方法为：

使用定位算法对荧光基准标记物和生物样品中的荧光分子进行定位；再通过聚类算法将每一个荧光基准标记物在成像序列中的定位位置序列归成一簇；获取每一个荧光基准标记物的定位序列，

步骤S3中，所述荧光基准标记物筛选的具体方法为：

S301：对多颗荧光基准标记物的定位轨迹值取平均，作为初始漂移轨迹；

S302：利用初始漂移轨迹对成像视场中的荧光基准标记物做漂移矫正，并利用矫正之后的荧光基准标记物坐标计算均方距离或者平均距离；

S303：筛选所述均方距离或者平均距离小于设定值的荧光基准标记物，作为定位荧光基准标记物。

2.根据权利要求1所述的基于基准标记物的漂移矫正与筛选方法，其特征在于：步骤S1中，所述荧光基准标记物通过固定技术固定在盖玻片上，或者固定到需要成像的生物样品内部，所述固定技术包括：非共价键的吸附、共价键结合或者用链亲和素的亲和捕获。

3.根据权利要求1所述的基于基准标记物的漂移矫正与筛选方法，其特征在于：在步骤S301执行前，还包括误差抑制步骤：通过平滑算法抑制所述荧光基准标记物的定位位置计算误差。

4.根据权利要求1所述的基于基准标记物的漂移矫正与筛选方法，其特征在于：步骤S302中，所述均方距离或者平均距离的计算公式为：

、，其中，为均方距离，为平均距离，为时间间隔，为整个成像序列中时间窗口为的所有可能组合，，为时间节点的定位位置。

5.一种成像方法，其特征在于：所述成像方法采用权利要求1-4任一项所述的基于基准标记物的漂移矫正与筛选方法。

6.根据权利要求5所述的成像方法，其特征在于：所述成像方法借助单分子定位实现超越衍射极限分辨率的成像，所述成像方法包括：随机光学重建显微镜成像技术及其各种技术衍化、光激活定位显微镜成像技术及其各种技术衍化、DNA点积累定位成像技术。