[发明专利]防控蓟马的引物组dsFoTOF/Rs、DNA、dsRNA、试剂盒及应用与方法

权利要求书

1.防控蓟马的引物组dsFoTOF/Rs，其特征在于，选自下述引物对的一对或两对：

序列如SEQ ID NO.1的dsFoTO6-F和序列如SEQ ID NO.2的dsFoTO6-R；

序列如SEQ ID NO.3的dsFoTO24-F和序列如SEQ ID NO.4的dsFoTO24-R。

2.防控蓟马的DNA，其特征在于，由引物对扩增获得；所述引物对选自下述引物对的一对或两对：

序列如SEQ ID NO.1的dsFoTO6-F和序列如SEQ ID NO.2的dsFoTO6-R；

序列如SEQ ID NO.3的dsFoTO24-F和序列如SEQ ID NO.4的dsFoTO24-R。

3.防控蓟马的dsRNA，其特征在于，以引物对扩增获得的DNA为模板合成；所述引物对选自下述引物对的一对或两对：

序列如SEQ ID NO.1的dsFoTO6-F和序列如SEQ ID NO.2的dsFoTO6-R；

序列如SEQ ID NO.3的dsFoTO24-F和序列如SEQ ID NO.4的dsFoTO24-R。

4.根据权利要求5所述的防控蓟马的dsRNA，其特征在于，所述防控蓟马指：降低蓟马的产卵量；

和/或，所述蓟马为西花蓟马。

5.防控蓟马的试剂盒，包括：活性成分；其特征在于，活性成分选自：权利要求1所述的防控蓟马的引物组dsFoTOF/Rs、和/或，权利要求3所述的防控蓟马的DNA、和/或，权利要求3或4所述的防控蓟马的dsRNA。

6.根据权利要求7所述的防控蓟马的试剂盒，其特征在于，还包括：辅助试剂；所述辅助试剂选自由下述试剂组成的组：扩增试剂、电泳试剂、dsRNA合成试剂；

和/或，所述扩增试剂包括：PCR反应混合液；

和/或，所述PCR反应混合液为2×ESTaqmix；

和/或，dsRNA合成试剂包括：转录反应缓冲液、RNA酶抑制剂、RNA聚合酶、dNTP；

和/或，转录反应缓冲液为10×TranscriptionReactionBuffer；

和/或，RNA酶抑制剂为RiboGuardRNaseInhibitor；

和/或，RNA聚合酶为T7RNAPolymerase；

和/或，所述防控蓟马指：降低蓟马的产卵量；

和/或，所述蓟马为西花蓟马。

7.权利要求1所述的防控蓟马的引物组dsFoTOF/Rs、和/或，权利要求2所述的防控蓟马的DNA、和/或，权利要求3或4所述的防控蓟马的dsRNA、和/或，权利要求5或6所述的防控蓟马的试剂盒防控蓟马的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，采用引物组dsFoTOF/Rs的引物对扩增获得防控蓟马的DNA；

和/或，以防控蓟马的DNA为模板合成防控蓟马的dsRNA；

和/或，用防控蓟马的dsRNA饲喂蓟马；

和/或，所述防控蓟马指：降低蓟马的产卵量；

和/或，所述蓟马为西花蓟马。

9.防控蓟马的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的防控蓟马的引物组dsFoTOF/Rs、和/或，权利要求2所述的防控蓟马的DNA、和/或，权利要求3或4所述的防控蓟马的dsRNA、和/或，权利要求5或6所述的防控蓟马的试剂盒进行防控。

10.根据权利要求9所述的防控蓟马的方法，其特征在于，采用引物组dsFoTOF/Rs的引物对扩增获得防控蓟马的DNA；

和/或，以防控蓟马的DNA为模板合成防控蓟马的dsRNA；

和/或，用防控蓟马的dsRNA饲喂蓟马；

和/或，所述防控蓟马指：降低蓟马的产卵量；

和/或，所述蓟马为西花蓟马；

和/或，采用序列如SEQ ID NO.1的dsFoTO6-F和序列如SEQ ID NO.2的dsFoTO6-R扩增获得的DNA为模板合成的dsRNA为dsFoTO6；

和/或，采用序列如SEQ ID NO.3的dsFoTO24-F和序列如SEQ ID NO.4的dsFoTO24-R扩增获得的DNA为模板合成的dsRNA为dsFoTO24；

和/或，用防控蓟马的dsRNA饲喂蓟马指：采用dsFoTO6和/或dsFoTO24饲喂蓟马；

和/或，每微升所述扩增的反应体系包括：0.5μL2×ESTaqmix、10μmol/L上游引物、10μmol/L下游引物、0.42μLcDNA模板，其余为水；

和/或，所述扩增的反应程序包括：95℃5min；以95℃30s、58℃45s、72℃1min/kb为一个循环，共35个循环；72℃10min；

和/或，每微升所述合成的反应体系包括：0.05μg/μLDNA模板、0.1μL10×TranscriptionReactionBuffer、0.125μLRiboGuardRNaseInhibitor、0.1μLT7RNAPolymerase、100mmoldNTP、其余为水；

和/或，所述合成的步骤包括：37℃金属浴1h-3h，按每微升反应体系加入0.05μLRNaes-FreeDNase，37℃金属浴30min；按每微升反应体系加入0.05μL5M醋酸铵，放在冰上15min，4℃13000rpm离心15min；

和/或，所述合成的步骤还包括：离心后去除上清液，将沉淀用1mL70％的乙醇洗涤，4℃8000rpm离心10min；倒掉乙醇溶液，晾干；加入200μLNuclease-FreeWater。