[发明专利]MDA5结合蛋白、制备方法和应用

说明书

本发明提供了MDA5结合蛋白、制备方法和应用，涉及抗体技术领域。该结合蛋白具有重链可变区和/或轻链可变区，重链可变区包括互补决定区VH‑CDR1(SEQ ID NO：1～4任一种)、VH‑CDR2(SEQ ID NO：5～8任一种)和VH‑CDR3(SEQ ID NO：9～12)任一种；轻链可变区包括互补决定区VL‑CDR1(SEQ ID NO：13～14任一种)、VL‑CDR2(SEQ ID NO：15～16任一种)和VL‑CDR3(SEQ ID NO：17～20任一种)。该结合蛋白与MDA5具有良好的特异性结合能力；该MDA5结合蛋白的制备方法操作简单，耗时短，生产工艺可控，批间差小。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，尤其是涉及一种MDA5结合蛋白、制备方法和应用。

背景技术

皮肌炎(dermatomyositis，DM)是一种主要累及横纹肌，以淋巴细胞浸润为主的非化脓性炎症病变，可伴有或不伴有多种皮肤损害。MDA5(抗黑色素瘤分化相关蛋白5)是一种胞质RNA解旋酶，是固有免疫防御病毒感染的重要蛋白。抗MDA5抗体是DM的特异性抗体，最常见于临床无肌病性皮肌炎患者中。MDA5抗体阳性皮肌炎指肺部影像学检查提示间质性肺炎，血清抗体检查可以发现抗MDA-5抗体阳性，这是一组以间质性肺炎和皮肤皮疹为特点的多系统炎性病变，属于皮肌炎的一个特殊亚型。有研究报道，62.5％的无肌病性皮肌炎患者血清中存在抗MDA5抗体。

抗MDA5抗体阳性皮肌炎是一种治疗难度比较大的疾病，患者早期病情比较轻微，随着时间的推移，如果不及时治疗可能会快速发展，而且预后效果比较差，对后期生活会有一定的影响，通过检测血清中该抗体水平，有助于对MDA5抗体阳性皮肌炎进行鉴别诊断，及时治疗。目前市面上常见的检测试剂盒中抗MDA5抗体多为免疫动物血清中提取纯化，或以人血清作为阴性或阳性对照，鉴于这两者的样本来源难度较大，操作复杂，开发出获取更简单，可规模化生产，广泛应用，尤其是可用于临床检测试剂盒中的高亲和力的抗MDA5的重组单抗，有着重要意义和价值。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供MDA5结合蛋白，该结合蛋白与MDA5具有良好的特异性结合能力。基于本发明提供的MDA5结合蛋白，本发明的目的还在于提供其应用。本发明的另一目的在于以操作更简单的方法开发结合活性好的MDA5结合蛋白，可用于MDA5抗原的鉴定，以及辅助进行MDA5抗体阳性皮肌炎诊断检测。

名词定义：

在本发明中“结合蛋白”此技术术语是指结合特定抗原的蛋白，其泛指包含互补决定区(CDR区)的一切蛋白及蛋白片段。蛋白及蛋白片段可以为抗体，“抗体”特别指全长抗体。“抗体”和“全长抗体”此用语包括多克隆抗体及单克隆抗体。此外，“抗体”此用语包括天然发生的抗体以及非天然发生的抗体，包括例如嵌合型(chimeric)、双功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗体，以及相关的合成异构形式(isoforms)。非天然发生的抗体在本文中也被称为“重组抗体”，“抗体”此用语可和“免疫球蛋白”互换使用。

蛋白及蛋白片段也可以是包含抗体CDR的一部分或全部的抗原结合片段，其缺乏至少一些存在于全长链中的氨基酸但仍能够特异性结合至抗原。此类片段具生物活性，因为其结合至靶抗原，且可与其他抗原结合分子(包括完整抗体)竞争结合至给定表位。此类片段选自但不限于F(ab’)₂、Fab’、Fab、Fv(由VH和VL构成)，ScFv(单链抗体，VH和VL之间由一连接肽连接而成)、单域抗体(仅由VH组成)、dsFv(二硫键稳定性Fv抗体(disulfidestabilized Fv fragments,dsFv))、双特异抗体、纳米抗体和抗体最小识别单位中的任意一种。除上述功能片段外，还包括半衰期已增加的任何片段。