[发明专利]血癌FLT3突变检测引物组和检测装置

权利要求书

1.血癌FLT3突变检测试剂引物组，用于检测FLT3基因的ITD和TKD突变，其特征在于，其中包括：

(1)检测FLT3-ITD突变的引物对：

FLT3-ITD-F(SEQ ID NO:1)：5’-GCAATTTAGGTATGAAAGCCAGC-3’

FLT3-ITD-R(SEQ ID NO:2)：5’-CTTTCAGCATTTTGACGGCAACC-3’

(2)检测FLT3-TKD突变的引物对：

FLT3-TKD-F(SEQ ID NO:3)：5’-GCACTCCAGGATAATACACATCACA-3’

FLT3-TKD-R(SEQ ID NO:4)：5’-

TCTTCGTGATATCCCCTGACAACATAGTTGGAATC-3’。

2.根据权利要求1所述的血癌FLT3突变检测试剂，其特征在于，还包括EcoRV限制性内切酶。

3.权利要求1所述的引物组在制备血癌FLT3突变检测试剂盒中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的应用中还包括如下步骤：

获得样本DNA，采用引物组进行多重PCR扩增，获得扩增产物；

对于ITD突变，根据扩增片段长度进行野生型和突变型的分型；

对于TKD突变，对扩增产物进行限制性酶切，并对酶切产物进行毛细管电泳检测，检测结果经荧光强度值的比较后，进行野生型和突变型的分型。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，多重PCR扩增的反应程序是：

98℃，30s；

(98℃，10s；64℃，20s；72℃，30s)循环31次；

72℃，5min。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，限制性酶切过程采用的EcoRV限制性内切酶。

7.血癌FLT3突变检测装置，其特征在于，包括：

PCR模块，用于对样本进行PCR扩增，扩增反应时采用上述的检测FLT3-ITD突变的引物对和检测FLT3-TKD突变的引物对进行多重PCR反应；

酶切反应模块，用于对PCR模块中获得的产物进行EcoRV限制性酶切，对D835和I836位点进行酶切；

荧光标记毛细管电泳模块，用于对PCR模块中获得的产物进行毛细管电泳，并获得ITD基因扩增产物的片段长度和荧光强度值，获得D835和I836位点进行酶切后的产物的片段长度和荧光强度值；

分析模块，用于根据荧光标记毛细管电泳模块得到的不同片段长度的扩增产物的荧光强度值对样本中的突变类型进行判定。

8.根据权利要求7所述的装置，其特征在于，所述的分析模块根据FLT3-ITD位点扩增片段大小进行分型；根据D835和I836位点酶切后的产物的片段大小进行FLT3-TKD分型。

9.根据权利要求7所述的装置，其特征在于，所述的分析模块进行FLT3-TKD分型时，通过计算酶切产物中的突变信号比率并与截断值进行比较，确定样本的分型。

10.所述的装置中还包括预测模块，用于根据突变分型的突变信号比(SR)预测出变等位基因比率(AR)，其分别采用不同的突变分析的突变信号比(SR)和等位基因比率(AR)的关系式进行计算，所述的关系式分别为：

D835突变，y＝2.3629x+0.0223；

I386缺失，y＝1.0425x-0.0067；

ITD插入123bp，y＝0.38872x+0.0021；

ITD插入207bp，y＝0.3489x-0.0167；

ITD插入30bp，y＝1.1344-0.0049；

ITD插入57bp，y＝1.3731-0.0218；

上式中，y为突变信号比(SR)，x为变等位基因比率(AR)。