[发明专利]一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法

权利要求书

1.一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将高活性的CK-MM蛋白置于第一变性剂溶液中进行第一变性处理得到无活性的变性CK-MM蛋白溶液；

将与所述高活性的CK-MM蛋白活性相当的CK-BB蛋白置于第二变性剂溶液中进行第二变性处理得到无活性的变性CK-BB蛋白溶液；

将所述变性CK-MM蛋白溶液和所述变性CK-BB蛋白溶液等活性混合，置于复性剂溶液中进行复性处理得到混合蛋白溶液；

将所述混合蛋白溶液进行纯化处理得到只含高纯度高活性的肌酸激酶同工酶CK-MB。

2.如权利要求1所述的一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法，其特征在于，所述第一变性剂溶液为含有3～6M第一变性剂、50～80mM第一缓冲液、5～10mM第一还原剂的溶液，溶液pH为7.0～8.5。

3.如权利要求2所述的一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法，其特征在于，所述第一变性剂为以下至少一种：盐酸胍、尿素；和/或，

所述第一缓冲液为以下至少一种：Tris-HCl缓冲液、PIPES缓冲液、MOPS缓冲液；和/或，

所述第一还原剂为以下至少一种：二硫基苏糖醇、半胱氨酸；和/或，

所述第一变性处理条件为：4～25℃下静置或搅拌10～24h。

4.如权利要求1所述的一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法，其特征在于，所述第二变性剂溶液为含有2～4M第二变性剂、50～80mM第二缓冲液、5～10mM第二还原剂的溶液，溶液pH为7.0～8.5。

5.如权利要求4所述的一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法，其特征在于，所述第二变性剂为以下至少一种：盐酸胍、尿素；和/或，

所述第二缓冲液为以下至少一种：Tris-HCl缓冲液、PIPES缓冲液、MOPS缓冲液；和/或，

所述第二还原剂为以下至少一种：二硫基苏糖醇、半胱氨酸；和/或，

所述第二变性处理条件为：4～25℃下静置或搅拌10～24h。

6.如权利要求1所述的一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法，其特征在于，所述高活性的CK-MM蛋白的活性为10⁵IU/L-10⁶IU/L。

7.如权利要求1所述的一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法，其特征在于，所述复性剂溶液含有50～80mM第三缓冲液、5～10mM第三还原剂、0.5～2mM螯合剂；所述复性剂溶液还含有以下至少一种：1～2M保护剂、10wt～20wt％稳定剂、1wt～2wt％表面活性剂。

8.如权利要求7所述的一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法，其特征在于，所述复性剂溶液还含有10wt～20wt％稳定剂和1wt～2wt％表面活性剂；或所述复性剂溶液还含有1～2M保护剂、10wt～20wt％稳定剂和1wt～2wt％表面活性剂。

9.如权利要求7所述的一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法，其特征在于，所述第三缓冲液为以下至少一种：Tris-HCl缓冲液、PIPES缓冲液、MOPS缓冲液；和/或，

所述第三还原剂为以下至少一种：二硫基苏糖醇、半胱氨酸；和/或所述螯合剂为EDTA。

10.如权利要求7所述的一种高效获取高纯度肌酸激酶同工酶CK-MB的方法，其特征在于，所述保护剂为以下至少一种：BSA、脯氨酸、PEG-1000；和/或，

所述稳定剂为以下至少一种：海藻糖、甘油、甘露糖醇；和/或，

所述表面活性剂为以下至少一种：Tween20、TritonX100。